人参皂苷rg1对抗脑缺血再灌注大鼠脑组织pjnk蛋白表达的定量分析论文

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1、人参皂苷Rg1对抗脑缺血再灌注大鼠脑组织pJNK蛋白表达的定量分析论文刘霞包翠芬魏嘉梁佳秦书俭【摘要】目的：探讨人参皂苷Rg1对脑缺血再灌注大鼠脑组织pJNK表达的影响。方法：取健康雄性SD大鼠30只,将其随机分为假手术组，模型组，人参皂苷Rg110、20、40mg/kg组，阳性药物对照组，每组5只。采用线栓法制作大脑中动脉栓塞模型。于MCAO术后6h，采用免疫印迹法对CA1区的pJNK蛋白表达情况进行定量检测。结果：模型组pJNK含量最高;假手术组含量最低;Rg120、40mg/kg组和阳性药物对照组pJNK蛋白含量显著降低，与模型组比较

2、有显著性差异(P0.05)，其中Rg140mg/kg组pJNK蛋白含量最低。结论：人参皂苷Rg1防治大鼠脑缺血再灌注损伤的机制可能与抑制脑组织pJNK表达有关.freeliareperfusion，CIR)后大鼠海马CA1区神经细胞pJNK的表达进行定量检测，并观察人参皂苷Rg1对pJNK蛋白表达的影响，以明确人参皂苷Rg1是否通过调控JNK蛋白的表达来抑制CIR损伤后的神经细胞凋亡。1材料与方法1.1实验动物及分组取健康雄性SD大鼠，饲养7天后随机分为6组：①假手术组;②模型组;③Rg110mg/kg组;④Rg120mg/kg组;⑤Rg140

3、mg/kg组;⑥阳性药物对照组。每组5只大鼠。③～⑤组分别于术前5天至取材当日连续腹腔注射人参皂苷Rg1;⑥组注射尼莫地平注射液，①、②组分别注射1.5ml等渗生理盐水，均为1次/d。1.2主要实验药品人参皂苷Rg1(纯度95%)，吉林大学有机化学教研室;尼莫地平注射液，山西亚宝药业，批号071001;兔抗鼠pJNK(Ser63)单克隆抗体，SANTACRUZ公司;Marker预染蛋白质分子量标准、BCA、NBT/BCIP、PMSF，碧云天生物技术研究所;其余试剂由辽宁医学院科学实验中心提供。1.3大鼠右侧局灶性脑缺血模型的制备10%水合氯醛(350m

4、g/kg)腹腔麻醉，模型制作采用改良线栓法1。线栓采用头端光滑烫圆的直径0.23mm鱼线，由右侧颈总动脉分叉部缓慢向颈内动脉颅内方向插入约(18.5±0.5)mm，使线头通过大脑中动脉起始处，阻断大脑中动脉的血流;假手术组插入深度15mm。阻塞后2h，将尼龙线轻轻拔出行再灌注，再灌注时间为4h。1.4免疫印迹检测及强度分析MCAO术后6h,取各组大鼠5只，迅速断头取出右侧海马置于液氮冷冻,-80℃冰箱保存。取冷冻脑组织,加入RIPA裂解液,剪碎、超声波粉碎20s后静置30min,4℃,12000r/min离心20min,留取上清液。用二喹啉甲酸法测定蛋白

5、含量,并按照每20μl含50μg蛋白制成样品，-20℃冰箱保存。按实验室常规上样、电泳、转膜后,5%小牛血清白蛋白室温封闭1～2h。加入一抗(兔抗大鼠pJNK,稀释度为1∶400)4℃孵育过夜,TBST缓冲液洗脱3次,.freelin;二抗(碱性磷酸酶标记的羊抗兔IgG抗体,稀释度为1∶200)室温孵育1h,TBST缓冲液洗脱3次,每次5min;BCIP/NBT显色;扫描电泳条带,用凝胶分析软件分析电泳条带强度。采用βActin作为内参照。扫描电泳条带,用凝胶分析软件分析各蛋白目的条带的吸光度。根据目的条带与内参照条带吸光度的比值表示待测蛋白含量。1

6、.5统计学分析数据分析应用SPSS10.0软件，所有数据均用±s表示。多组间差异显著性检验采用单因素方差分析。2结果免疫印迹染色结果显示，模型组大鼠大脑右侧海马CA1区pJNK含量最高;假手术组pJNK含量最低;Rg120、40mg/kg组和阳性药物对照组大鼠海马CA1区的pJNK蛋白含量显著降低，与模型组比较有显著性差异(P0.05)，其中Rg140mg/kg组pJNK蛋白含量最低;Rg110mg/kg组与阳性药物对照组比较有显著性差异(P0.05)，而Rg120、40mg/kg组与阳性药物对照组比较无统计学差异(P0.05)。见表1，图1。表

7、1各组大鼠MCAO术后6h海马CA1区pJNK蛋白表达含量比较注：与假手术组比较，*P0.05;与模型组比较，#P0.05;与阳性药物对照组比较，△P0.05;与Rg110mg/kg组比较，▲P0.05;与Rg120mg/kg组比较，★P0.05。3讨论CIR损伤最终导致神经细胞凋亡或坏死。因此，干预神经细胞凋亡过程是治疗CIR损伤的关键之一。研究表明，cjun氨基末端激酶(cjunNH2terminalkinase，JNK)信号转导通路是目前已被证实的一条导致细胞凋亡的重要信号通路2。JNK一旦被激活，称为pJNK，立即从细胞质移位至细胞

8、核，并可以引起级联反应，最终导致细胞凋亡。研究证实，人参皂苷Rg1具有抑制多巴胺