氟达拉滨气道滴入对小鼠病毒性肺炎疗效观察论文

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1、氟达拉滨气道滴入对小鼠病毒性肺炎疗效观察论文【摘要】目的：探讨氟达拉滨气道滴入对小鼠仙台病毒性肺炎是否具有治疗作用。方法:将21只ICR小鼠随机分为对照组、仙台病毒组和仙台病毒加氟达拉滨治疗组。接种病毒和用药7d后评价各组一般状况、病理学表现，测定肺组织信号转导和转录活化因子1（signaltransductionandactivationoftranscription1，STAT1）核酸和蛋白表达水平。结果:仙台病毒经鼻滴入可引起严重的肺部炎症，肺组织STAT1mRNA和蛋白表达下降（P0.05）。氟达拉滨治疗组虽STAT1核酸和蛋白表达下降，但肺部炎症反应较仙台病毒组轻，淋巴细

2、胞浸润程度较仙台病毒组轻（P0.05）,动物一般情况有所改善。结论:氟达拉滨气道滴入在仙台病毒导致的小鼠病毒性肺炎中具有减轻气道炎症、抑制淋巴细胞募集和改善动物一般状况的作用。该作用与氟达拉滨抑制STAT1合成的作用无关，而可能与其抑制淋巴细胞的作用有关。【关键词】氟达拉滨仙台病毒信号转导和转录活化因子1小鼠肺部病毒性疾病种类众多，由于其发病机制还不完全明了.freelega产品；引物由上海生工生物工程有限公司合成；显微镜和图像分析软件为ZeissAxioCamMRcolor；垂直电泳及蛋白半干转印设备和凝胶扫描仪均为BioRad；BandLeader凝胶条带分析软件。1.2方法

3、1.2.1动物分组21只小鼠随机分为3组，每组7只，为对照组（A组）、仙台病毒组（B组）和仙台病毒加氟达拉滨治疗组（C组）。1.2.2仙台病毒滴度测定和仙台病毒肺炎模型的建立取新鲜鸡全血，分离红细胞。在血凝板中每孔加入0.5ml0.5%的鸡红细胞PBS悬液,共8孔。每孔再加入0.5ml仙台病毒鸡胚尿囊液，浓度从1/10到1/1280成倍递减，另设一孔为阴性对照。室温静置3060min后观察血凝结果，红细胞呈伞状在血凝板底部沉积，边缘略呈伞状翻卷为阳性，血球呈点状沉积于血凝板底部者为阴性。以阳性结果的最高稀释度为血凝效价。本实验采用的仙台病毒血凝效价为1∶320。小鼠吸入乙醚作轻度麻醉

4、后，A组经鼻滴入50μlPBS，B、C组动物均经鼻滴入同体积仙台病毒鸡胚尿囊液制备仙台病毒肺部感染模型，C组同时滴入0.04mg·ml-1的氟达拉滨PBS溶液25μl。1.2．3氟达拉滨用药方法参照我们以往实验结果，选择0.001mg·只-1为气道局部用药剂量2。1.2.4动物一般状况和大体病理观察每日记录小鼠体质量，观察动物一般状况。7d后将小鼠脱颈椎处死后取肺组织，将左肺上叶置10%中性福尔马林中固定行连续石蜡切片(厚4μm),常规苏木素伊红（HE）染色行病理观察；右肺中下叶同样方法固定以备免疫组织化学分析；左下叶肺组织冻存于-70℃作MLV（Promega）逆转录合成第一链。

5、取第一链cDNA产物2μl进行后续PCR反应。STAT1上游引物序列为5′TGGGAGCACGCTGCCTATGATGTC3′,下游引物序列为5′CCTTCGCTTCCACTCCACGAGCTC3′，产物大小为610bp4。作为内参照的βactin上游引物序列为5′CCCAGAGCAAGAGAGGTATC3′，下游引物序列为5′GACCAGAGGCATACAGGGAC3′,产物大小267bp5。PCR反应体系50μl，各成分按照Taq酶（Promega）使用说明配制。反应条件：95℃5min；94℃30s,60℃30s,72℃1min，共35个循环；72℃10min

6、。PCR完成后产物行1.5％琼脂糖凝胶电泳，紫外灯下照相，凝胶分析软件分析。以STAT1相对于βactin的灰度值作为STAT1的含量。1.3统计学处理所有数据均以x-±s表示。多组间比较使用Kruskalann1的生成有关。在多种慢性炎症性疾病中可观察到STAT1的活化810，且我们在脂多糖诱导的小鼠肺炎中也观察到了STAT1的高表达，因此STAT1是一个新的抗炎药物的靶点和评价抗炎作用的指标。近年来有研究认为，氟达拉滨对STAT1表达具有强大的抑制作用，效果甚至优于糖皮质激素和环胞霉素1112。因此对STAT1的抑制作用是氟达拉滨的重要抗炎机制。但本实验中，仙台病毒感

7、染的动物虽出现了严重的肺部炎症，然而肺组织STAT1蛋白和核酸表达水平反而下降。这与文献中的报道，即仙台病毒感染可降低总的STAT1表达水平，并抑制STAT1酪氨酸磷酸化和脱磷酸化13是一致的。因此，氟达拉滨在仙台病毒感染中的抗炎效果不能用抑制STAT1来解释。氟达拉滨作为抗肿瘤药物的作用原理，主要体现在抑制淋巴细胞的活化。在病毒感染时，CD8+T淋巴细胞起着关键的抗病毒作用，但CD8+T细胞的细胞毒作用同样可对正常组织造成破坏。Sullivan等对致死性