反相高效液相色谱法测定夏枯草中两种三萜酸的含量论文

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1、反相高效液相色谱法测定夏枯草中两种三萜酸的含量论文【关键词】夏枯草；,,乌索酸；,,齐墩果酸；,,反相高效液相色谱法摘要：目的建立同时测定夏枯草中乌索酸及齐墩果酸含量的方法。方法采用反相高效液相色谱法。色谱柱为NucleodurC18柱(4.6mm×250mm，5μm)，流动相为甲醇:水（86∶14），流速为0.8ml/min，检测波长为210nm，柱温25℃。结果乌索酸进样量在0.4252～3.8268μg，齐墩果酸进样量在0.1272～1.1448μg范围内，线性关系良好.freelinationofTethodforsimulta

2、neousdeterminationofursolicacidandoleanolicacidinPrunellavulgarisL．MethodsThehighperformanceliquidchromatographynm×250mm，5μm)column，themobilephaseconsistedofmethanol-l/minandthedetection.ResultsThelinearrangeethodissimple,accurate,reliableandcanbeusedforqualitycontrolofP

3、runellavulgarisL．Keypom×250mm，5μm)，带保护柱，流动相为甲醇-水（86:14），流速为0.8ml/min，检测波长210nm，柱温25℃，外标法定量分析，乌索酸和齐墩果酸理论塔板数均大于10000。对照品及夏枯草样品的HPLC色谱见图1。a对照品b夏枯草样品1.齐墩果酸2.乌索酸图1对照品和夏枯草样品的HPLC色谱图（略）2.2溶液的配制2.2.1对照品储备液精密称取干燥至恒重的乌索酸对照品21.26mg，齐墩果酸对照品6.36mg，置于10ml容量瓶中，加入适量甲醇溶解，定容，摇匀，作为乌索酸和齐墩果酸

4、对照品储备液，备用。2.2.2夏枯草样品溶液将药材夏枯草在80℃下恒温干燥12h，取适量夏枯草于高速万能粉碎机中粉碎，备用。精密称取夏枯草粉末约2g，置具塞三角烧瓶中，加入95%乙醇溶液30ml，超声提取120min，放冷，滤过，滤渣再加入少量乙醇，超声洗涤2次，合并滤液至50ml容量瓶中，乙醇定容，摇匀，得样品溶液。2.3标准曲线的绘制精密吸取乌索酸和齐墩果酸对照品储备液1ml至10ml容量瓶中，甲醇定容，摇匀，制成含乌索酸0.2126mg/ml，齐墩果酸0.0636mg/ml的对照品混合溶液。分别吸取2，6，10，14，18μl，按

5、2.1色谱条件进样测定峰面积，以峰面积（μVs）为纵坐标，进样量（μg）为横坐标，进行线性拟合，得乌索酸回归方程为Y=5.18×105X-1.35×103，r=0.99984；齐墩果酸回归方程为Y=3.28×105X-1.90×103，r=0.99960，表明当乌索酸进样量在0.4252～3.8268μg，齐墩果酸进样量在0.1272～1.1448μg范围内，线性关系良好。2.4精密度实验精密吸取乌索酸和齐墩果酸的对照混合溶液20μl进样，乌索酸峰面积相对标准偏差（RSD）为0.6%（n=5），齐墩果酸的峰面积RSD0.9%（n=5）。

6、结果表明仪器系统精密度良好。2.5重现性实验精密称取同一批夏枯草样品5份，每份约2g，按样品溶液配制方法制备溶液，精密吸取20μl进样分析，乌索酸峰面积RSD为1.1%（n=5），齐墩果酸峰面积RSD为1.2%(n=5)。2.6加样回收率实验精密称取已知乌索酸和齐墩果酸含量的夏枯草样品5份，每份约1g，分别加入乌索酸和齐墩果酸对照品储备液1.0ml，制备样品溶液。精密吸取20μl进样分析，得乌索酸的平均加样回收率为98.0%，RSD为1.0%，齐墩果酸的平均加样回收率为98.7%，RSD为1.4%。2.7样品分析结果精密吸取样品溶液20

7、μl进样，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定样品中乌索酸和齐墩果酸的峰面积，平行3次，计算样品中乌索酸和齐墩果酸的平均含量。结果见表1。表1夏枯草样品中乌索酸和齐墩果酸的测定结果（略）3讨论3.1样品提取方法的选择夏枯草中乌索酸和齐墩果酸的提取多采用乙醇回流法［11］和乙醚索氏提取法，操作时间长，提取工艺复杂，提取率低，而采用超声波提取夏枯草中的两种有效成分，操作简单，提取时间短，提取率高，有利于样品中有效成分的快速富集，具有快速、环保、节省溶剂等优点，提取液中杂质较少，样品经0.45μm滤膜过滤后可直接进样，对色谱柱无污染。3.2样品

8、提取时间的选择考察了不同提取时间对样品中乌索酸提取率的影响。当夏枯草样品超声提取120min后，继续延长提取时间，提取率无明显变化，确定样品的提取时间为120min。3.3检测波长的选择采用光电二极管矩阵检