组织芯片检测snail mrna的表达及其与胃癌的关系

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1、组织芯片检测snailmRNA的表达及其与胃癌的关系作者：张莉丽张布衣姚根有【摘要】目的探讨转录因子snailmRNA在胃癌中的表达及其与临床病理特征和预后的关系。方法制作组织芯片，在组织芯片上通过原位杂交检测snailmRNA在25例非肿瘤胃黏膜组织和100例胃癌组织中的表达情况。结果100例胃癌中snailmRNA的阳性表达率46%，snailmRNA的阳性表达率与胃癌的TNM分期（r=0.176,P=0.027）、淋巴结转移（r=0.299,P=0.003）、脉管转移（r=0.208,P=0.03

2、8）、分化程度（r=0.203,P=0.042）呈正相关，与胃癌的病灶大小、浸润深度、远处转移无明显相关性。snailmRNA的阳性表达病例的平均生存时间和5年生存率明显低于阴性表达的病例。结论snailmRNA的表达可预测胃癌的浸润和转移，是指导临床治疗及估计预后的有意义指标。【关键词】胃癌原位杂交组织芯片　　【Abstract】ObjectiveToexploretheexpressionofsnailmRNAinthetissueofgastriccanceranditsrelationshipR

3、NAin25nonetumormucoustisseand100gastriccancertissueRNAin100casesofgastriccancerphnodemetastasis（r=0.299,P=0.003）、vesslemetastatis（r=0.208,P=0.038）anddifferentiation（r=0.203,P=0.042）,butnotrelatedtothesizeofcacer,depthofinvasivenessanddistantmetastasis.Th

4、eaveragesurvivaltimeand5yearssurvivalrateRNAthaninthecasesRNAhasacloserelationshipetastasisthereforeishelpfulinpredictingtheprognosisandtreatingofgastriccancer.　　【KeyRNA在非肿瘤性胃黏膜和胃癌组织中的表达情况，探讨其与胃癌发生、进展、浸润、转移及预后的关系。　　1材料和方法　　1.1材料　　　　收集本院1995年1月至2000年12月胃癌

5、根治标本100例，所有病例术前均未经任何治疗。男70例，女30例(男女比例2.3：1)；年龄29～82岁(中位年龄为62岁)。参照分期［２］：T1期21例，T2期28例；T3期33例，T4期18例；周围神经侵犯15例；脉管侵犯54例淋巴结转移49例；远处转移18例。75例有5年以上完整随访资料，生存期的计算从手术日期至随访截止日期，或由于复发、转移而死亡的日期为止。另取同期25例正常胃黏膜组织作对照。　　1.2方法　　制备组织芯片：根据HE切片在每一病例组织蜡块上选取3个代表性区域，制作带有阵列孔的受体

6、蜡块，挖取供体蜡块上选定的区域放入受体蜡块阵列孔中，2次包埋，制成组织芯片蜡块,用德国LEica切片机连续作5μm厚切片，制备过程中所用器具均经灭活RNA酶处理。原位杂交：狄高辛标记的snail(MK652)寡合苷酸探针及相应的原位杂交试剂盒购自武汉博士德公司，杂交方法按试剂盒说明书进行。snialmRNA检测：石蜡组织芯片经常规二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化，用0.2N稀盐酸灭活过氧化物酶，蛋白酶K暴露mRNA片段，洗涤，然后42℃预杂交2h后滴加杂交液，42℃过夜，充分洗涤后滴加封闭液室温30min，滴加

7、抗体复合物室温2h，再次充分洗涤后BCIP/NBT室温避光显色12～24h。　　1.3结果判断　　snailmRNA阳性染色定位于细胞质中，呈紫蓝色为着色细胞，根据阳性细胞占全部肿瘤细胞的百分比及着色程度判别结果：无明显阳性反应细胞或着色细胞数＜10%为阴性（－），阳性细胞数≥10%或着色较强者为阳性（＋）。　　1.4统计学处理　　用SPSS13.0统计软件。snailmRNA表达与胃癌各临床病理参数间的关系用非参数统计中Spearman等级相关进行分析，对生存数据进行Kaplan－MEIer分析，并绘

8、制生存曲线，应用Log－rank检验差异性。　　2结果　　2.1snailmRNA的表达及其与胃癌关系　　见表1。25例非肿瘤性胃实质细胞中4例snailmRNA阳性表达(占16%)，100例胃癌组织中46例snailmRNA染色阳性(占46%)，两者差异有统计学意义（P=0.000）。阳性表达主要见于胃癌细胞浆中，部分位于胞核中，间质中的巨噬细胞和成纤维细胞中也见散在着色，表达阳性的肿瘤细胞多位于浸润前沿，累及肌层、浆膜、腹膜、胰腺等（图