胃癌组织中kai1 mrna表达的意义

《胃癌组织中kai1 mrna表达的意义 》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、胃癌组织中KAI1mRNA表达的意义刘茗露刘斌邢传平陈一伟郭峰【摘要】　　目的：探讨KAI1基因和蛋白在正常胃黏膜、不典型增生胃黏膜及癌组织中的表达及其与之发生、发展的关系.方法：应用原位杂交技术和免疫组织化学技术检测不典型增生胃黏膜65例及胃癌组织74例中KAI1mRNA和KAI1蛋白的表达.结果：KAI1mRNA和KAI1蛋白在胃癌组织中表达显著降低，与正常胃黏膜、不典型增生胃黏膜组织中表达的差异有显著性意义（χ2=36.328，P0.05）.在胃癌组中不同的浸润深度、有无淋巴结转移和脉管侵犯组中阳性表达率的差

2、异性有统计学意义（P0.05）；而在年龄、性别组间的差异性无统计学意义（P>0.05）.结论：KAI1mRNA和蛋白低表达在胃癌组织中的发生、发展中可能起着重要作用，有望成为早期诊断、评估肿瘤细胞侵袭转移潜能的指标之一.【关键词】胃肿瘤KAI1原位杂交免疫组织化学0引言胃癌是消化道最常见的肿瘤，KAI1基因产物与CD82结构相同，参与细胞黏附、运动和信号转导，与多种肿瘤的转移和预后有密切关系〔1〕，作为一个肿瘤转移抑制基因，表达降低可使细胞细胞基质的黏附力改变及细胞间相互作用降低.故KAI1基因在胃癌组织中

3、的表达水平值得关注，但国内及国外目前对于KAI与消化道肿瘤的报道意见不甚一致.我们用原位杂交法和SP免疫组化方法检测正常胃黏膜、不典型增生胃黏膜及癌组织中KAI1mRNA和KAI1蛋白的表达，以探讨在胃癌发生发展、转移浸润过程中相关基因间的作用、关系及其意义，为该肿瘤的诊断治疗提供依据.1材料和方法1.1材料200408/200507病理科存档石蜡标本.不典型增生胃黏膜65例，轻、中、重度不典型增生分别为20，21和24例.胃癌组74(男49，女25)例，年龄30～84（中位62）岁，术前均未行放疗和化疗，高

4、、中、低分化腺癌分别为21，24，21例,黏液细胞癌8例；淋巴结转移阳性组36例，淋巴结转移阴性组38例；有脉管侵犯者25例，无脉管侵犯者49例；标本均经40g/L甲醛固定，常规石蜡包埋，4μm厚切片，分别进行HE、免疫组化及原位杂交染色.同时取距离肿瘤组织>5cm的胃黏膜22例作为非肿瘤组织对照.胃癌组织20例采用了组织芯片的方法；其余组织则采用了常规切片的制作方法.兔抗人KAI1，过氧化酶标记的链霉卵白素染色试剂盒、DAB显色试剂盒及原位杂交检测试剂盒（PanPath产品）购自北京中杉金桥生物技术有限公

5、司.鼠抗人KAI1单抗为美国Pharmingen公司产品.KAI1寡核苷酸探针序列为：①5＇AGGATCCACACCCCGAAGCCCAGGATCACT3＇；②5＇CAGCGCTTCACCTGAGCCTGCACGTAGTCC3＇探针片段长度21bp，3＇端标记地高辛，由上海生工有限公司合成.组织芯片制作：用特殊基质制作25mm×25mm×5mm的空白载体；用直径0.5cm的骨髓穿刺针在每块空白基质载体打孔，相邻孔间为1mm；对常规固定的的大体胃癌标本进行穿刺，获取直径为0.4cm柱形组织，放入基质载体已打好的孔里，

6、癌组织部分朝向包埋面，进行脱水、浸蜡、包埋.制作组织芯片蜡块，将组织芯片蜡块以4～6μm厚连续切片，敷贴于10g/L多聚赖氨酸处理的载玻片上，分别进行HE染色、免疫组化及原位杂交染色.1.2方法1.2.1原位杂交所有器皿、玻片、缓冲液、双蒸水均予灭活RNA酶处理，玻片及盖玻片均予硅化处理.石蜡切片常规脱蜡至水，30mL/LH2O2室温处理10min以灭活内源性过氧化物酶，双蒸水洗涤3min×2次.切片上滴加30mL/L盐酸新鲜稀释的胃蛋白酶，37℃消化30min，级别乙醇中脱水.变性及杂交：每张切片加地高辛标记KA

7、I1探针20μL，加专用盖玻片，置95℃烤箱变性5min；37℃杂交过夜，TBS液洗涤去掉盖玻片，加生物素化鼠抗地高辛，37℃孵育30min，TBS液洗涤3min，双蒸水洗涤1min，DAB显色，苏木素复染，封片.实验设空白对照和阳性对照（采用在所有人体组织中均表达的人Alu片断寡核苷酸探针）.原位杂交胞膜上及胞质中出现棕褐色颗粒为阳性染色，（-）为无杂交信号；（+）杂交信号为弱阳性；（）杂交信号为阳性；（）杂交信号为强阳性.1．2．2免疫组化组织切片经二甲苯脱蜡，梯度乙醇脱水后行免疫组化染色.采用高压锅高温抗

8、原修复后，余步骤按SP法试剂盒说明书进行操作.DAB显色，苏木精复染，中性树胶封固.PBS代替一抗作为阴性对照.免疫组化KAI1蛋白阳性为胞膜上及胞质中出现棕褐色颗粒.采用双盲法对每张切片在高倍镜（×400）下计数10个视野，首先按染色强度评分，无染色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；再以阳性细胞所占百分比评分，阴性为0分，阳性细胞≤10%