cd147分子在胆管癌浸润及转移中作用及机制的研究论文

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1、CD147分子在胆管癌浸润及转移中作用及机制的研究论文贺伟旗，王曙光，顾建文，匡永勤，程敬民，邢学民，杨文涛，张俊海【摘要】目的了解CD147与胆管癌侵袭转移的关系。方法通过RTPCR和免疫荧光法了解CD147在胆管癌细胞株QBC939中的表达.freeletastasisandinvasionofbileductcancerornot.MethodsTheexpressionofCD147inbileductcancercellstrainQBC939munofluorescence.Thenarebinantadenoviralve

2、ctorcontainingCD147cDNAinanantisenseorientationatrixmetalloproteinase(MMPs)andthegroanbileductcancercellstrainQBC939edbyRTPCRandindirectimmunofluorescence.TheresultsshoetastasisofbileductcancercellsbydecreasingtheexpressionlevelofMMP2,notMMP9.ConclusionThisstudyindicat

3、esthatblockingthemoleculeexpressionofCD147maybeaneffectiveentofthetumor.Keyetastasis胆管癌可通过多种途径转移1。CD147是一种广泛分布于多种细胞的属于免疫球蛋白超家族(immunoglobulinsuperfamily，IgSF)的跨膜糖蛋白。在多种肿瘤中发现有CD147表达的增高，并与肿瘤的浸润和转移相关。有学者从人肺癌LX1细胞膜上分离出来CD147MMP1复合物，说明CD147不仅能刺激纤维母细胞产生MMP1，还能结合MMP1于肿瘤细胞表

4、面，从而促进肿瘤的浸润2。有研究表明，MMPs在胆管癌的浸润及转移中也起了很重要的作用34。而CD147是否参与调节胆管癌的浸润及转移过程，CD147刺激MMPs产生的作用及两者的关系尚未见文献报道。本研究设想对于MMP上游的CD147分子进行干预将会对胆管癌的生物学行为产生影响，从而对胆管癌的浸润及转移起到抑制或阻断的作用。以胆管癌细胞株QBC939细胞为研究对象，首先了解CD147分子在其中的表达，并通过构建携带反义CD147分子的腺病毒载体，将其转染胆管癌细胞株QBC939细胞，以观察减少CD147分子信号通路对胆管癌体外及体内生

5、物学行为的影响，探讨CD147的表达与MMPs之间的关系及在胆管癌浸润及转移中的作用。1材料与方法1.1材料实验细胞株：人胆管癌细胞株QBC939由全军肝胆外科研究所建立。实验动物：健康纯种SPF级BALB/C6周龄雌性裸鼠15只，体重（24±3）g，购自上海药物研究所实验技术中心。实验试剂：各种限制性内切酶，T4DNA聚合酶、TaqDNA聚合酶、RTPCR试剂盒购自Roche公司。PCR产物试剂盒、小量质粒提取试剂盒、琼脂糖凝胶回收试剂盒、DNA快速连接试剂盒购自宝生物公司。脂质体转染试剂盒LipofectinReagent购自Inv

6、itrogen公司，AdEasyXLAdenoviralVectorSystem试剂盒购自Stratagene公司。FITC标记和HRP标记的羊抗兔IgG、兔抗人CD147抗体、兔抗人MMP2抗体和兔抗人MMP2抗体购自武汉博士德公司。1.2方法1.2.1QBC939细胞中CD147mRNA表达检测（RTPCR）登录Genebank根据人CD147的基因序列，运用Primer5软件设计得到目的基因引物：5’GAAGGAAGTGTATGATGGGAAT3’和5’GCGGTTGGAGGTTGTAGG3’。提取培养72h的QBC9

7、39细胞总RNA，按RTPCR试剂盒说明书行cDNA链的合成和PCR扩增，所得到的PCR产物通过凝胶电泳进行鉴定。1.2.2免疫荧光法检测QBC939细胞中CD147蛋白表达QBC939细胞培养72h后，PBS洗涤3次，用4%的多聚甲醛固定。滴加未标记的兔抗人CD147抗体(1∶200)，37℃孵育30min后，PBS洗涤3次。加入FITC标记的羊抗兔IgG抗体(1∶100)，37℃孵育30min后，PBS洗涤3次，并置于荧光显微镜下观察。1.2.3反义CD147腺病毒载体的构建及扩增通过PCR方法扩增人全长CD147cDNA片断，扩增

8、的cDNA连接到pGEMTEasy质粒中进行大量扩增。得到的CD147cDNA片断与pShuttleCMV质粒反向连接，连接后得到pShuttleCMVasCD147，同时转DH5α感