brca1蛋白在胰腺癌组织中的分布和表达论文

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1、BRCA1蛋白在胰腺癌组织中的分布和表达论文王春杨，张金山，张远强，孙圣坤，蔡伟，高江平，洪宝发，王晓雄.freelentofcancer.METHODS：UsingthehumanbreastcancercelllineMCF7aspositivecontrol,thesubcellulardistributionofBRCA1munofluorescencestainingandimmunohistochemistry.RESULTS：BRCA1munofluorescencestainingrevealedthattheinteraction

2、ofBRCA1proteinbetandnucleusstimulatedBRCA1nuclearexporticshuttlingmannerent.CONCLUSION:DistributionofBRCA1inplasmandnucleusofpancreaticcancercellsindicatesthatitmaybeinvolvedinproteinfunctionregulationofpacreaticcancertissue,possessthecharactersofproteinsrelatedtocancerdevelop

3、ment,andbeeabetterbiologicaltargetfortheclincaltherapyofpancreaticcancer.【Keys;BRCA1;tissues;nuclearexport0引言近年来研究表明，BRCA1的背景是乳腺癌相关蛋白，其基因是肿瘤抑制基因之一.BRCA1蛋白由1863个氨基酸组成，有N端、C端和中间ATM,ATR的磷酸化区组成.如果有BRCA1基因突变的患者直到70岁前其乳腺癌的发病率85%左右，这比普通人群远远高出20倍.许多高度散发型乳腺癌和卵巢癌的病例也有BRCA1蛋白表达明显降低的现象，许多

4、研究已经提示了其在散发型乳腺癌和卵巢癌中的重要作用［1］；但BRCA1在胰腺癌组织的分布及其作用近年鲜有报道.很多证据证实BRCA1在许多细胞过程中是非常必须的：如DNA修复,细胞周期，checkpointcontrol,转录调节和凋亡，直到染色体重建［2-5］,但是其肿瘤抑制功能中的作用机制有待进一步研究，尤其是在胰腺肿瘤等与激素有关的肿瘤中BRCA1特性蛋白和导致肿瘤发生的原因需要进一步研究，我们对BRCA1蛋白在胰腺癌的分布和特性以及可能有关机制进行了研究和讨论.1材料和方法1.1材料解放军总医院确诊胰腺癌病例石蜡包埋标本20例，第四军医大学

5、组胚教研室胰腺癌病例石蜡包埋存档标本15例.荧光显微镜（OlympusBX60），小鼠抗人BRCA1mAb（molecularprobes）,FITC标记的和AvidinTexasred标记的第2抗体（山羊抗小鼠IgG，molecularprobe公司）和苏木精和伊红（HE）染料.1.2方法1.2.1组织切片制备胰腺癌组织切成4mm×5mm的方块，经40g/L多聚甲醛固定(含苦味酸)后梯度脱水、浸蜡过夜高温包埋.石蜡切片机进行切片，成5μm石蜡切片，经贴片、脱蜡、复水等过程后准备做抗体染色或HE染色.1.2.2免疫荧光双重染色和免疫荧光显微镜观

6、察细胞阳性对照操作：消毒无菌的盖玻片无菌操作在洁净台下用镊子放在6孔板中，2.5g/L的胰酶消化后的MCF7用DMEM培养液悬浮后分装到6孔板中，每孔细胞数量2×105，细胞贴壁后24h置入-20℃,700mL/L乙醇中固定10min，pH值7.2~7.4的0.01mol/LPBS冲洗充分后与准备好的组织切片成套以20mL/LBSA封闭1h，浸润BRCA1第一抗体（稀释比例1∶100，molecularprobes）4℃过夜.第二抗体FITC羊抗小鼠（稀释比例1∶400，molecularprobes）或者第二抗体AvidinTexasred

7、山羊抗小鼠（稀释比例1∶400，molecularprobes）室温摇动充分浸润4h.pH值7.2~7.4的0.01mol/LPBS冲洗3遍，最后以DAPI复染10min，荧光封片剂封片（vector）待观察计数。每组实验重复进行3次.显微镜观察时每个病例取5组切片，每张切片读取10个高倍视野约500个肿瘤细胞.1.2.3HE染色选择相邻组织切片经贴片、脱蜡、复水的胰腺癌病例组织切片后，再经苏木精染色10min，常规梯度脱水，800mL/L乙醇脱水后经伊红染色1min，依次经900,1000mL/L乙醇脱水、二甲苯透明，封片剂封片待观察以确定显微

8、镜下肿瘤组织和细胞.统计学处理:所有数据均采用x±s表示，组间比较采用t检验，P0.05为差异有统计学意义.2结果2.1B