大肠埃希菌连续分离株耐药表型及复方磺胺甲口恶唑耐药相关基因研究论文

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1、大肠埃希菌连续分离株耐药表型及复方磺胺甲口恶唑耐药相关基因研究论文王伟糜祖煌毛剑锋徐伟珍【摘要】目的了解临床分离的大肠埃希菌耐药性和复方磺胺甲口恶唑(SMZ/TMP)耐药相关基因存在状况。方法测定临床连续分离的60株大肠埃希菌对19种抗菌药物的敏感性，采用聚合酶链反应(PCR)检测SMZ/TMP耐药相关基因(sul1、dfrA1、dfrA17)。结果60株中sul1、dfrA1、dfrA17基因阳性分别为34株(56.7%)、1株(1.7%)、35株(58.3%)。结论临床分离的大肠埃希菌多重耐药严重；复方磺胺甲口恶唑耐药相关基因携带率

2、高。【关键词】大肠埃希菌；复方磺胺甲口恶唑；耐药基因ABSTRACTObjectiveToinvestigatethedrugresistanceanddrugresistancerelatedtrimethoprimsulfamethoxazolegenesinExcherichiacoli.MethodMicrodilutiontestsedtodetectsusceptibilityof60strainsofEscherichiacolito19antimicrobialagentsanddrugresistancerela

3、tedtrimethoprimsulfamethoxazoleultipledrugresistanceandhighpositiverateofdrugresistancerelatedtrimethoprimsulfamethoxazdegenesinEscherichiacoliisolatedfromthehospital.KEYZ/TMP)耐药相关基因报道。我们对60株连续分离株EC菌进行了药敏表型检测，并进行了SMZ/TMP耐药相关基因sul1、dfrA1、dfrA17检测，现报道如下。1材料与方法1.1菌株来源60

4、株EC菌均分离自2006年08月～2006年12月间丽水市人民医院住院患者临床标本，其中痰液10例.freell离心管内(内预置200ng/ml蛋白酶K溶液200μl)，56℃水浴2h，然后95℃水浴10min，加入Chelex100树酯40μl，离心(15000r/min)30s。上清液即为基因检测的模板液，-20℃冰箱保存备用。1.4基因检测用聚合酶链反应法(PCR)进行检测。PCR引物序列见表1。PCR扩增体系为：每反应体系P1、P2引物各0.5μmol，dNTPs各200mmol，KCl10mmol，(NH4)2SO48mmol

5、，MgCl22mmol，TrisHCl(pH9.0)10mmol，NP400.5%，BSA0.02%(in，然后93℃30s→55℃30s→72℃60s，循环35周期，再72℃延伸5min。耐药基因检测试剂盒、靶基因PCR引物序列和阳性对照DNA由无锡市克隆遗传技术研究所提供(表1)。扩增产物经2%琼脂糖凝胶电泳，紫外凝胶电泳成像仪下观察，并纪录结果。表1sul1、dfrA1、dfrA17基因PCR引物序列及产物长度2结果2.1药敏试验结果60株EC菌连续分离株对亚胺培南和美罗培南敏感。对头孢他啶、阿莫西林/克拉维酸、头孢西丁、阿米卡

6、星、头孢哌酮/舒巴坦和哌拉西林/三唑巴坦等6种抗菌药物的敏感率在53.3%～95%；对头孢噻肟、头孢呋辛、妥布霉素、庆大霉素、环丙沙星、哌拉西林、阿莫西林和替卡西林等8种抗菌药物的耐药率在50%～90%。对复方磺胺甲口恶唑的耐药率为66.7%。2.2sul1、dfrA1、dfrA17基因sul1、dfrA1、dfrA17基因阳性率分别为56.7%(34/60)、1.7%(1/60)、58.3%(35/60)。有35株检出dfrA基因(58.3%)，40株检出sul和(或)dfrA基因(66.7%)。图1为sul1基因PCR产物电泳图。d

7、frA17基因PCR产物经测序与美国GenBank核酸数据库中已登录的dfrA17基因序列完全一致。3讨论EC菌广泛分布于自然界、健康人的皮肤、肠道和呼吸道。正常情况下，EC菌并不感染人体的任何组织，但当人体免疫力降低、长期大量使用广谱抗菌药物或创伤性医疗操作等情况下易引起内源性感染。EC菌所致感染中以泌尿道感染、呼吸道感染、菌血症等最常见。复方磺胺甲口恶唑为磺胺甲基异口恶唑(sulfamethoxazole，SMZ)与甲氧苄胺嘧啶(trimethoprim，TMP)的复合制剂，磺胺的抑菌机制为与化学结构相似的对氨苯甲酸(PABA)竞

8、争二氢叶酸合成酶(DHPS)，使二氢叶酸合成减少；甲氧苄胺嘧啶能抑制二氢叶酸还原酶(DHFS)，使四氢叶酸的生成受阻。磺胺药与甲氧苄胺嘧啶合用后，分别作用于细菌叶酸合成的不同环节，因而有协同作用［1］。近年