20株阴沟肠杆菌耐药性及耐复方磺胺甲口恶唑相关基因研究

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1、20株阴沟肠杆菌耐药性及耐复方磺胺甲口恶唑相关基因研究作者：蔡培泉黄支密王春新糜祖煌【摘要】目的探讨临床分离的阴沟肠杆菌耐药性和耐复方磺胺甲口恶唑(SMZ/TMP)相关基因存在状况。方法采用ATB药敏试验板微量肉汤法测定临床分离的20株阴沟肠杆菌对20种抗菌药物的敏感性，采用PCR检测耐复方磺胺甲口恶唑相关基因sulI、dfrA1和dfrA17。结果20株菌对亚胺培南和美罗培南均敏感，对其他抗菌药物的不敏感率在25.0%～100%之间。sulI、dfrA1和dfrA17基因阳性率为85.0%(17/20)、5.0%(1/2

2、1)、60.0%(12/20)。结论阴沟肠杆菌具明显的多重耐药特征。耐复方磺胺甲口恶唑相关基因携带率很高。【关键词】阴沟肠杆菌；复方磺胺甲口恶唑；耐药基因ABSTRACTObjectiveToinvestigatetheantimicrobialresistanceandthesulfamethoxazole/trimethoprimresistantassociatedgenesinEnterobactercloacae.MethodsMicrodilutiontestsedtodetectthesusceptibili

3、tyof20kindsofantimicrobialagentsagainst20strainsofEnterobactercloacae.ThesulI,dfrA1anddfrA17genesipeneamandmeropenem.Theresistantratestootherantimicrobialagentsbetultiple-drug-resistance.Therehospital.KEYZ/TMP);Drug-resistantgenes近年来阴沟肠杆菌(Enterobactercloacae)已成为医院

4、感染的重要病原菌。蔡少华等的呼吸机相关肺炎的病原学和耐药性监测报道中阴沟肠杆菌分离率已居肠杆菌科第三位［1］。我国有关阴沟肠杆菌产AmpC酶、TEM、SHV和CTX-M等类型β-内酰胺酶［2～5］，产氨基糖苷类修饰酶已有报道［6，7］。经检索国内尚无复方磺胺甲口恶唑(SMZ/TMP)耐药相关基因报道。我们对从临床分离的20株阴沟肠杆菌进行了药敏试验，并检测了SMZ/TMP耐药相关基因sulI、dfrA1和dfrA17，现报道如下。1材料与方法1.1菌株来源及鉴定20株试验菌株全部分离自浙江湖州解放军98医院2003年9月～

5、2004年4月住院患者送检的各种标本，其中创伤伤口分泌物13份、痰液4份、烧伤创面分泌物2份、脑脊液1份。用Bio-Merieux公司API20E鉴定菌种。标准菌株为大肠埃希菌ATCC25922、大肠埃希菌ATCC35218和铜绿假单胞菌ATCC27853。1.2药敏试验微量肉汤法，采用Bio-Merieux公司产品ATBG-5药敏试验板，共测试20种抗菌药物的敏感性。1.3sulI、dfrA1、dfrA17基因检测检测采用聚合酶链反应(PCR)法，用蛋白酶K消化法制备DNA扩增模板。根据GenBank()中已发布的sul

6、I、dfrA1、dfrA17基因序列自行设计引物，PCR扩增引物序列及产物长度见Tab.1。各种靶基因PCR扩增体系为：酶反应体系P1、P2引物各0.5μmol/L，KCl10.0mmol/L，(NH4)2SO48mmol/L，MgCl22mmol/L，Tris-HCl(pH9.0)10mmol/L，NP400.5%，TaqDNA聚合酶1U。全部反应体积20μl，其中模板液5μl。热循环参数为93℃预变性2min，然后93℃30s→55℃30s→72℃60s，共35周期；最后一个循环72℃延伸至5min。产物经2%琼脂糖凝

7、胶电泳，EB染色，紫外灯下观察结果，出现与阳性对照分子相当的目的条带判为阳性，并拍照保存。耐药基因检测试剂盒、靶基因PCR引物序列和阳性对照DNA由无锡市克隆遗传技术研究所提供。2结果2.1药敏试验本组菌株多重耐药性严重，仅对亚胺培南和美罗培南全部敏感(Tab.2)。2.2sulI、dfrA1、dfrA17基因PCR检测sulI、dfrA1、dfrA17基因阳性率分别为85.0%(17/20)、5.0%(1/21)、60.0%(12/20)。Fig.1为sulI基因PCR产物电泳图。20株阴沟肠杆菌SMZ/TMP敏感性和s

8、ulI、dfrA1、dfrA17基因检测结果见Tab.3。3讨论中国医院内病原菌耐药监测网资料显示［8］，近年来阴沟肠杆菌的多重耐药性十分严重，对常用的抗生素的耐药率在逐年上升。由药敏试验结果得知，本组菌株对青霉素类、青霉素类/β-内酰胺酶抑制剂复合物、第一～三代头孢菌素类、复方磺胺甲口恶唑和环丙沙星的