九节茶高效液相色谱指纹图谱分离条件的优化

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1、九节茶高效液相色谱指纹图谱分离条件的优化作者：杨方明李卫民高英李永平【摘要】　　目的优化九节茶HPLC指纹图谱分离条件。方法使用色谱柱KromasilC18(250mm×4.6mm，5μm)，流动相为甲醇-0.2%磷酸溶液，柱温为25℃，流速为0.7ml/min，检测波长为340nm，考察九节茶的最佳梯度洗脱条件。结果经优化的分离条件为：0～35min，甲醇由20%线性增至40%；35～65min甲醇由40%增至60%，65～75min甲醇由60%减至20%，75～78min甲醇保持20%，可使主要成分达到较

2、好的分离。结论通过对九节茶HPLC指纹图谱分离条件的优化，更有利于控制九节茶药材的质量。【关键词】九节茶高效液相色谱指纹图谱　　Abstract:ObjectiveTooptimizetheseparationconditionsoffingerprintforSarcandraGlabrousHerbbyHighPerformanceLiquidChromatographyandlaythefoundationofstudiesonitsqualitycontrol.MethodsThesamplesasi

3、lC18(250mm×4.6mm，5μm)ethanol-0.2%phosphoricacidsolutionasmobilephase,thedetection,columntemperature25℃andtheflol/min.ResultsDuringthelineargradientelutionprogram,thevolumefractionofmethanolinmobilephasechangedasfolloin,from20%to40%;35～65min,from40%to60%;65～

4、75min,from60%to20%;75～78min,20%.Theseparationconditionsachievedgoodresultintheseparationofessentialponents.ConclusionThemethodismorebeneficialtocontrolqualityofGlabrousSarcandraHerb.　　Keyatogram　　九节茶系金粟兰科植物草珊瑚Sarcandraglabra（Thunb.）Nakai的干燥全草，又名肿节风、接骨金粟兰、草珊

5、瑚、接骨木，为多年生常绿草本或亚灌木。九节茶味苦辛、性平、有小毒，有祛风通络、活血散淤、止血止痛、接骨续筋之功用［1］，临床应用广泛，特别是对呼吸系统、消化系统的炎症性疾患具有较高疗效，还用于骨伤科疾病及各种癌症。　　《中国药典》2005年版Ⅰ部对九节茶药材的质量控制是采用HPLC测定其中异嗪皮啶的含量［2］，但是单一指标性成分的含量测定往往难以反映中药整体质量，不能较全面反映中药品质。有　　图2b条件：0～40min,甲醇由15%线性增至35%；40～60min甲醇由35%增至50%，60～70min甲醇由

6、50%减至15%，70～72min甲醇保持15%，进样量为10μl，柱温为25℃，流速为0.7ml/min。色谱图（见图2b）可以看出，色谱峰的分布有所改善，但峰与峰的分离状况不理想。　　图1优化条件Ⅰ的HPLC图（略）　　图2优化条件Ⅱ的HPLC图（略）　　2.2.3优化条件Ⅲ　　图3a条件：0～35min,甲醇由17.5%线性增至40%；35～60min甲醇由40%增至60%，60～70min甲醇由60%减至17.5%，70～72min甲醇保持17.5%，进样量为10μl，柱温为25℃，流速为0.7ml/

7、min。其色谱图（见图3a）可以看出，色谱峰之间基本达到分离，且均匀分布在0～60min内，但部分峰有拖尾的现象。　　图3b条件：0～35min,甲醇由20%线性增至40%；35～65min甲醇由40%增至60%，65～75min甲醇由60%减至20%，75～78min甲醇保持20%，进样量为10μl，柱温为25℃，流速为0.7ml/min。色谱图（见图3b）可以看出，无论是色谱峰的分离度、分布均匀性及峰形均与指纹图谱技术要求相符合。　　图3优化条件Ⅲ的HPLC图（略）　　2.3方法学考察为考察分析方法的可靠

8、性，对其稳定性、仪器精密度、实验方法重现性进行考察。　　2.3.1精密度实验取供试品溶液连续进样5次，记录指纹图谱。以保留时间为49.5min的峰为参照物峰，计算共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD值分别在0.48%～0.92%和1.15%～1.97%之间，符合指纹图谱要求。　　2.3.2重现性实验精密称取药材5份，照供试品溶液制备方法制备5份样品溶液，分别进样并记录指纹图谱。以保留时间为49.5