霉茶缓释片的高效液相色谱指纹图谱的研究

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1、霉茶缓释片的高效液相色谱指纹图谱的研究作者：王桂红，吴杰，聂华，乔明，郑国华【摘要】　　目的建立霉茶缓释片的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱，更有效地监控其质量。方法采用梯度洗脱法,对霉茶缓释片进行HPLC测定,检测波长29nm，流动相为乙腈-%磷酸线性梯度洗脱对霉茶缓释片中总黄酮进行指纹图谱测定。采用中国药典委员会推荐的中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件(版本:004A)进行比较计算。结果通过软件的比较,霉茶缓释片的指纹图谱相似度均大于，建立霉茶缓释片中总黄酮的共有指纹图谱。结论所建立的方法可作为霉茶缓释片的指纹图谱，有助于霉

2、茶缓释片的质量控制。【关键词】霉茶缓释片霉茶大叶蛇葡萄高效液相色谱指纹图谱霉茶为葡萄科蛇葡萄属植物大叶蛇葡萄Dielset.Gilg的枝叶加工而成，主要分布于湖北、陕西、四川等地。在湖北恩施地区，民间将其叶置沸水中稍烫，沥干，摊放通风处至表面上有白霉，泡茶服，称为霉茶［1］。霉茶缓释片主要是以霉茶总黄酮提取物为原料制成的缓释片。霉茶中主要有效部位为总黄酮，经药理实验表明，霉茶总黄酮提取物可明显降低糖尿病家兔的血糖，减轻其肾组织的损害，显著抑制NOS的活性，稳定血清NO的含量，表明霉茶总黄酮对T2DM有一定的治疗作用［2］。现代药

3、理研究其同属植物广西藤茶总黄酮提取物,具有降血糖、抗炎、镇痛和增强免疫作用［3］。本研究建立了HPLC对霉茶缓释片进行指纹图谱的测定方法,建立霉茶缓释片的总黄酮的共有指纹图谱，为霉茶缓释片质量控制提供科学依据。1仪器与试药戴安P680高效液相色谱仪;SC-101型鼓风电热恒温干燥箱(上海市仪器试验总厂);Mettler-ToledoAG285型分析天平；DZHW型调温电热套；HH-4型数显恒温水浴锅；KQ3200B型超声波清洗器；蛇葡萄素，杨梅素，槲皮素对照品;其余均为分析纯，蒸馏水为自制。霉茶均采自于湖北省恩施州来凤县，经我院

4、鉴定教研室鉴定为AmpelopsismegalophyllaDielset.Gilg。自制10批霉茶缓释片。方法.1色谱条件AichromBond-AQC18色谱柱;流动相为乙腈-%磷酸水，按表1的条件进行梯度洗脱，流速为ml/min；柱温：25℃；检测波长：29nm；进样量μl。.供试品溶液的制备取霉茶缓释片20片，研细，取约g粉末，精密称定后，置索氏提取器中，加甲醇80ml，回流至提取液无AlCl3显色反应，提取液甲醇定容于100ml，经μm滤膜过滤，即得供试品溶液。表1流动相梯度.对照品溶液的制备分别取蛇葡萄素、槲皮素、杨

5、梅素对照品适量，置10ml量瓶中，加入适量甲醇，超声溶解，经μm滤膜过滤，即得对照品溶液。.稳定性及精密度考察取第3批霉茶缓释片，按照供试品溶液制备方法制备成供试品溶液，连续进样5次，测定以11号峰杨梅素为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积。结果,峰号1～11相对保留时间的RSD(%)分别为，，，0224，，，，，，，0；相对峰面的RSD(%)分别为，，，，，，，，，，0，在24h之内基本稳定。.重复性实验取第8批霉茶缓释片5份，分别按照供试品溶液制备方法制备成供试品溶液，分别进样测定。结果,峰号1～11相对保留时间

6、的RSD(%)分别为，，，，，，，，，，0；相对峰面的RSD(%)分别为，，，，，，，，，，0。.霉茶总黄酮提取物HPLC指纹图谱及其技术参数.霉茶缓释片HPLC指纹图谱建立及分析见图1。.6.共有指纹峰的标定采用中国药典委员会推荐的相似度评价软件系统进行分析［4］，根据相关要求［5］，确定共有峰和指纹峰。以相对保留时间标定其共有峰11个，以第11号峰为参照峰S，测定各共有峰相对保留时间，结果表明RSD﹤%。见图2。.6.共有指纹峰面积的比值根据10批霉茶总黄酮提取物色谱图测定结果，以S参照峰峰面积为1，计算各共有指纹峰相对峰面

7、积。结果见表2。表2不同样品的共有峰相对面积值.6.共有峰的归属在同样色谱条件，测定蛇葡萄素、槲皮素、杨梅素，对比其保留时间和相应时间位置的色谱峰的紫外光谱情况，确定指纹图谱中的3号峰为蛇葡萄素，9号峰为槲皮素，11号峰为杨梅素。.指纹图谱及相似度分析根据《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求》的要求，采用中国药典委员会推荐的相似度评价软件系统进行分析［4］，得出霉茶缓释片的HPLC共有指纹图谱，见图3，并计算相似度。结果见表3。表3霉茶各缓释片批次样品指纹图谱的相似度讨论.1流动相的选择及梯度洗脱条件的确定采用乙腈-磷酸缓冲盐、乙

8、腈-水、乙腈-%-%不同浓度的冰醋酸、乙腈-%磷酸、甲醇-水、甲醇-不同浓度的磷酸水体系，实验结果表明乙腈-%磷酸系统较好，基线漂移小、出峰数目多、峰分离情况也比较理想。在此基础上，调整了乙腈与%磷酸梯度洗脱的比例关系，最终确定了色谱洗脱条件。.2检测波长的选择