吴茱萸高效液相色谱指纹图谱的研究

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1、吴茱萸高效液相色谱指纹图谱的研究作者：莫善列，李战，欧莹，韦松，思秀玲【关键词】吴茱萸；,,高效液相色谱；,,指纹图谱　　摘要：目的研究吴茱萸药材高效液相色谱（HPLC）指纹图谱的测定方法。方法AlltimaC18柱（4.6mm×150mm,5μm）；流动相∶乙腈∶甲醇∶水（2.0%四氢呋喃+0.4%醋酸）=45∶3∶52；检测波长：225nm；流速：1.0ml/min；柱温：25℃。结果HPLC指纹图谱共有8个色谱峰(RSD≤3%)，符合有关规定。结论所建立的HPLC指纹图谱为吴茱萸的质量控制提供了更全面

2、的信息,并为吴茱萸及含吴茱萸药材的中成药指纹图谱研究奠定了基础。　　关键词：吴茱萸；高效液相色谱；指纹图谱　　Abstract：ObjectiveTostudytheHPLCfingerprintofFructusEvodiae.MethodsChromatographicconditionsincludedAlltimaC18columnandthemobilephaseposedofamixtureofacetonitrilecarbinol.Themobilephaseflol/min.Results

3、TheHPLCfingerprintconsistedof8peaks(RSD≤3%)，andreachedtosomerelevantprovision.ConclusionThemethodcanprovidemoreinformationforthequalitycontrolofFructusEvodiae,anditmaybepracticallyvaluableforthequalitycontrolofsampleforFructusEvodiaeandit'spreparation.　　Ke

4、yaC18(4.6mm×150mm,5μm)色谱分析柱；超声仪B5200S-DT；乙腈、四氢呋喃和甲醇为色谱纯(天津四友生物医学技术有限公司)；乙醇和醋酸为分析纯（汕头市天华化学厂）；吴茱萸碱和吴茱萸次碱购于中国药品生物制品检定所。实验中所用吴茱萸采自广西博白(No.1)、广西龙州(No.2)、贵州清镇(No.3)、广西武宣(No.4)、贵州铜仁(No.5)、广西全州(No.6)、广西河池(No.7)、广西百色(No.8)、广西梧州(No.9)，经笔者签定均为芸香科吴茱萸属植物吴茱萸Evodiarutaec

5、a(fuss.)benth.的干燥近成熟果实。　　2方法与结果　　2.1色谱条件AlltimaC18(4.6mm×150mm,5μm)；流动相∶乙腈∶甲醇∶水（2.0%四氢呋喃+0.3%醋酸）=45∶3∶52；检测波长：225nm；流速：1.0ml・min-1；柱温：25℃。进样量：供试品溶液与对照品溶液各20μl；理论塔板数以吴茱萸碱和吴茱萸次碱计都不少于4000。　　2.2对照品溶液的制备精密称取吴茱萸碱和吴茱萸次碱，加甲醇制成每毫升甲醇含吴茱萸碱2.2mg，吴茱萸次碱1.2mg的溶液作为

6、对照品溶液。　　2.3供试品的制备称取吴茱萸10g用100ml乙醇超声提取30min，过滤，滤液减压回收溶剂至干，甲醇溶解并定容至25ml,取溶液过0.45μm微孔滤膜为供试品溶液。　　2.4方法学考察　　2.4.1稳定性实验取药材样品号为No.5的药材，按供试品溶液制备方法制备供试品溶液，在0，4，8，12，20h进样5次检测指纹图谱，1次20μl。结果见表1。结果表明：供试品溶液常温下在20h内，各色谱峰的相对保留时间和峰面积没有明显的变化，符合指纹图谱的要求。　　表1吴茱萸的稳定性实验(略)　　2.4

7、.2精密度实验取No.4药材的样品，按供试品溶液制备方法制备供试品溶液，连续进样5次，检测指纹图谱。结果见表2。结果表明各色谱峰的相对保留时间和峰面积基本一致。　　2.4.3重现性实验取No.6药材样品5份，分别按供试品溶液制备方法制备供试品溶液，并分别测定其色谱图。结果见表3。结果其相对保留时间稳定，峰面积基本一致，说明本方法重现性较好。　　2.5指纹图谱测定　　2.5.1指纹图谱及共有峰标定共有指纹峰的标定：取9批吴茱萸样品，分别按供试品的制备方法处理，在上述色谱条件下，测定其色谱图。其中6号峰保留时间

8、与吴茱萸碱峰保留时间一致，作为参照峰。综合9批样品的色谱图，发现其中有8个峰为9批样品所共有的，因此确定为共有指纹峰；经计算各色谱图中共有指纹峰总面积占所有色谱峰面积的百分比在85～95之间。根据9批样品的平均值，以保留时间与吴茱萸碱峰一致的6号峰为参照峰，标定了8个共有指纹峰及其相对保留时间如：1（0.192~0.200），2（0.216~0.227），3（0.551~0.606），4（0.642~0.643）