不同细胞因子组合对人脐血单个核细胞体外扩增及cd49d和cxcr4表达的影响

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1、不同细胞因子组合对人脐血单个核细胞体外扩增及CD49d和CXCR4表达的影响作者：毛平，许力，莫文健，应逸，许艳丽，林秀梅【摘要】为了探讨不同的细胞因子组合对脐血单个核细胞体外的扩增作用及扩增后CD49d和CXCR4的变化，将新鲜脐血标本分离的单个核细胞接种于含有不同细胞因子组合的无血清无基质培养体系中培养7天，在0天，7天检测有核细胞数，CD34+细胞数及CD34+CXCR4+，CD34+CD49d+的细胞数和集落形成单位(CFU)数.根据不同细胞因子组合实验分组为：对照组;SF组（SCF+FL）;SFT组（SCF+FL+TPO）和S

2、FT6组(SCF+FL+TPO+IL-6)。结果表明，和对照组相比，SF组合仅能低水平支持脐血造血细胞扩增，加入TPO后即SCF/FL/TPO组合能有效的扩增脐血细胞，但SFT和SFT6两组之间差异却无明显发生（P>0.05）；SF，SFT和SFT63组的细胞因子组合均可提高脐血CD34+细胞CD49d，CXCR4的表达，但3组之间差异无显著性（P>0.05）。结论：SF组合可协同扩增人造血细胞，但协同作用较弱；TPO在脐血造血干/祖细胞体外扩增中起重要调节作用，而IL-6作用不显著;SCF/FL/TPO3种因子组合不仅可促

3、进脐血造血祖细胞的扩增，而且可上调脐血造血细胞CD49d，CXCR4表达。【关键词】脐血　　EffectofDifferentCytokinebinationsontheExpressionofCD49dandCXCR4andExvivoExpansionofUmbilicalCordBloodMononuclearCells　　　AbstractThisstudyononuclearcellsdrivedfromumbilicalcordblood（CB）exvivoandexpressionofCXCR4andCD49donCD34

4、+cellsafterexpansion.HumanfreshCBmononuclearcells-freeandstroma-freemediumcontainingdifferentbinationsofcytokinefor7days.Atdayoand7，thetotalcellsetry，andCFUined.Accordingtothedifferentbinationsofcytokine，experiments/progenitorsexpansiontoahigherlevelthanthatinSFgroup，iti

5、vehematopoieticcells.TPOplaysanimportantroleinenhancingexpansionofumbilicalcordbloodhematopoieticcells，otesprogenitorcellsexpansionbutalsoupregulatestheexpressionofCD49dandCXCR4onCD34+cellsfromcordblood.　　Keybilicalcordblood;cytokinebination;expansionexvivo;mononuclearce

6、ll;CD49d;CXCR4　　脐血作为一种新的造血干／祖细胞来源，目前已广泛的用于临床造血干细胞的移植，但是，由于单份脐血细胞所含的造血干细胞数量较少，且移植后中性粒细胞和血小板较骨髓和动员的外周血移植后恢复慢［1］，而体外扩增脐血细胞有望能解决这一问题。因此，对脐血造血祖细胞体外扩增已成为血液学研究的热点。理想的扩增方案应该能够促进造血祖细胞的增殖能力并且扩增后的细胞能够归巢到造血微环境和重建造血，这些与扩增体系中的细胞因子的选择和组合、扩增之后脐血细胞归巢和迁移能力有很大关系。本实验比较了不同因子组合对脐血造血祖细胞的扩增效率和扩

7、增后归巢相关受体的变化，以确定最佳的细胞因子组合，为扩增脐血临床应用提供理论基础。材料和方法　　标本的收集和制备　　10份脐血标本来源于本医院妇产科，采自健康正常分娩的胎盘组织，平均采集量为50-110ml，肝素抗凝，24小时内用羟乙基淀粉（脐血∶羟乙基淀粉=5∶1）混合，沉淀30-45分钟，吸取上层细胞，加在含人淋巴细胞分离液（Ficoll-Hypaque1.077）的10ml离心管中（脐血∶人淋巴细胞分离液约=2∶1），1800-2000转/分，离心25分钟，吸取细胞膜层部分，用PBS洗2次，用IMDM去黏附，2小时后调整细胞浓度备

8、用。　　细胞因子及实验分组　　干细胞因子（SCF），FLT3配基（FL），血小板生成素（TPO），白介素-6（IL-6），均购于Peprotech公司。SCF、FL、IL-6终浓度为50ng/ml，TPO终