不同细胞因子组合对人脐血单个核细胞体外扩增及cd49d和cxcr4表达的影响论文

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1、不同细胞因子组合对人脐血单个核细胞体外扩增及CD49d和CXCR4表达的影响论文.freelbilicalCordBloodMononuclearCellsAbstractThisstudyononuclearcellsdrivedfromumbilicalcordblood（CB）exvivoandexpressionofCXCR4andCD49donCD34+cellsafterexpansion.HumanfreshCBmononuclearcells-freeandstroma-freemediumcontainingdif

2、ferentbinationsofcytokinefor7days.Atdayoand7，thetotalcellsetry，andCFUined.Accordingtothedifferentbinationsofcytokine，experiments/progenitorsexpansiontoahigherlevelthanthatinSFgroup，itivehematopoieticcells.TPOplaysanimportantroleinenhancingexpansionofumbilicalcordbloodh

3、ematopoieticcells，otesprogenitorcellsexpansionbutalsoupregulatestheexpressionofCD49dandCXCR4onCD34+cellsfromcordblood.Keybilicalcordblood;cytokinebination;expansionexvivo;mononuclearcell;CD49d;CXCR4脐血作为一种新的造血干／祖细胞来源，目前已广泛的用于临床造血干细胞的移植，但是，由于单份脐血细胞所含的造血干细胞数量较少，且移植后中性粒细胞和

4、血小板较骨髓和动员的外周血移植后恢复慢［1］，而体外扩增脐血细胞有望能解决这一问题。因此，对脐血造血祖细胞体外扩增已成为血液学研究的热点。理想的扩增方案应该能够促进造血祖细胞的增殖能力并且扩增后的细胞能够归巢到造血微环境和重建造血，这些与扩增体系中的细胞因子的选择和组合、扩增之后脐血细胞归巢和迁移能力有很大关系。本实验比较了不同因子组合对脐血造血祖细胞的扩增效率和扩增后归巢相关受体的变化，以确定最佳的细胞因子组合，为扩增脐血临床应用提供理论基础。材料和方法标本的收集和制备10份脐血标本来源于本医院妇产科，采自健康正常分娩的胎盘组织，

5、平均采集量为50-110ml，肝素抗凝，24小时内用羟乙基淀粉（脐血∶羟乙基淀粉=5∶1）混合，沉淀30-45分钟，吸取上层细胞，加在含人淋巴细胞分离液（Ficoll-Hypaque1.077）的10ml离心管中（脐血∶人淋巴细胞分离液约=2∶1），1800-2000转/分，离心25分钟，吸取细胞膜层部分，用PBS洗2次，用IMDM去黏附，2小时后调整细胞浓度备用。细胞因子及实验分组干细胞因子（SCF），FLT3配基（FL），血小板生成素（TPO），白介素-6（IL-6），均购于Peprotech公司。SCF、FL、IL-6终浓度为

6、50ng/ml，TPO终浓度为20ng/ml。根据不同细胞因子组合实验分组为：①空白对照组，②SF组（SCF+FL），③SFT组（SCF+FL+TPO），④SFT6组(SCF/FL+TPO+IL-6)。脐血MNC体外培养StemspanTM培养液(Stemcell公司产品)含1%的BSA，10μg/ml胰岛素，200μg/ml转铁蛋白，10-4mol/L2-ME，2mmol/LL-谷氨酰胺及IMDM。脐血MNC以终浓度为1×106接种于25ml培养瓶，培养体系为6ml，置于37℃、5%CO2饱和湿度条件下培养7天，培养第3天半量换液

7、，于0，7天检测各项指标。造血祖细胞集落培养MethoCultTMGF(H4434)(Stemcell公司产品)含1%甲基纤维素，30%FB，1%BSA，10-4mol/L2-ME，50ng/mlrhSCF，50ng/mlGM-CSF，10ng/mlrhIL-3，3U/mlrhEPO，造血祖细胞集落培养14天后于倒置显微镜下记数CFU数。流式细胞术检测流式细胞仪为美国BectonDickinson公司FACSVantage产品，使用CellQuest软件系统进行分析，用于人CD34+，CXCR4+，CD49d+细胞检测的单克隆抗体分

8、别为APC标记的抗CD34单克隆抗体，FITC标记的抗CD49d单克隆抗体，PE标记的抗CXCR4单克隆抗体。统计分析运用SPSS统计软件包分析，数据采用均数±标准差表示，组间比较采用方差分析。结果体外扩增过程中有核细胞数及CD34+