热盛胃出血小鼠模型的制作及墨旱莲对其止血作用机制的研究论文

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1、热盛胃出血小鼠模型的制作及墨旱莲对其止血作用机制的研究论文庄晓燕杨菁李华侃于冬梅王建【摘要】目的：制作热盛胃出血小鼠模型，探讨墨旱莲对其止血的机制。方法：以等量的附子、干姜、肉桂、党参、黄芪、辣椒水煎剂(1g/ml)给小鼠灌服，每日1次连服10d后，尽食16h，给模型组腹腔注射消炎痛并灌服乙醇，制成热盛胃出血模型;并对其中3组灌以不同剂量的墨旱莲水煎剂。1.5h后摘眼球取血，测量血小板聚集率等。解剖小鼠取胃观察并记录胃黏膜出血点。结果：热盛胃出血小鼠模型制作成功。其胃黏膜出血点较空白对照组明显增多(P0.01)，血小板积聚率也明显下降。而

2、不同浓度的墨旱莲水煎剂对热盛胃出血小鼠模型均有明显止血作用.freelin三层纱布过滤4次，置电热套中煎煮，所得煎出液，加热至沸腾，再用文火煮1h，所得煎出液，混合后减压浓缩至1g/ml。热盛胃出血模型药的制备：将等量的附子、干姜、肉桂、党参、黄芪、辣椒用蒸馏水浸泡30min，加热至沸腾，再用文火煮1h，三层纱布过滤3次所得煎出液，混合后减压浓缩至1g/ml。消炎痛注射液的制备：将消炎痛片碾碎，溶于蒸馏水中，过滤至澄清后，浓缩至7.5mg/ml。血小板积聚率相关试剂的配制：磷酸盐缓冲液的配制称取氯化钾2g、磷酸二氢钾2g、氯化钠80g、磷

3、酸氢二钠8.8g、加蒸馏水1000ml，调节pH值至7.4;EDTA缓冲掖的配制0.07mol/LEDTA3ml加磷酸盐缓冲液5ml，再加蒸馏水12ml;EDTA甲醛缓冲液的配制0.07mol/LEDTA3ml加4%甲醛溶掖5ml，再加磷酸盐缓冲液2ml，加蒸馏水12ml，调节pH值至7.4。血小板稀释液的配制：将0.16mol/L尿素、1.7mmol/L枸橼酸钠、40%甲醛各0.1ml加蒸馏水至100ml，过滤后4℃保存。1.3主要仪器旋转蒸发器(R201BⅡ)，上海申顺生物科技有限公司;连续变倍体式镜(XST18型)，上海蒲光显

4、微仪器有限公司;普通光学显微镜(4XBE型)，上海长方光学仪器有限公司;调节电热套(DZTg/g鼠重、10mg/g鼠重、20mg/g鼠重。各组动物均饲以普通饲料，其中Ⅱ～Ⅴ组小鼠每日灌服热盛胃出血模型药5g/kg鼠重1次;Ⅰ组小鼠灌以等量生理盐水;连续给药10日后，尽食16h;Ⅱ～Ⅴ组小鼠腹腔注射7.5mg.ml消炎痛的蒸馏水溶液0.01ml/g鼠重，Ⅰ组小鼠灌以等量生理盐水;30min后，Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组小鼠以墨旱莲水煎剂灌胃，用量分别为5mg/g鼠重;10mg/g鼠重;20mg/g鼠重;Ⅰ组、Ⅱ组小鼠灌以等量生理盐水;3h后重复灌胃1次。

5、第2次灌胃2h后，Ⅱ～Ⅴ组小鼠再灌服50%乙醇0.01ml/g鼠重，Ⅰ组小鼠灌以等量生理盐水。1.5h后取材检测。2.2指标检测2.2.1胃黏膜出血点计数断颈处死小鼠取胃，结扎幽门，从食管注入10%甲醛溶液2ml，结扎贲门后，将胃浸入10%甲醛溶掖中固定10min后取出，沿胃大弯剪开，铺平，在连续变倍体式镜下观察并计数胃黏膜出血点。2.2.2血小板集聚率的测定每只动物用两个试管，一个试管注入EDTA甲醛缓冲液2ml，另一个试管注入EDTA缓冲液2ml;摘取小鼠眼球取血两份，均为0.4ml分别注入两个试管中混匀，室温下放置15min;以1

6、000r/min离心8min，取上层富含血小板血浆;在普通光学显微镜下计数两份富含血小板血浆中血小板数的差值与不含甲醛的富含血小板血浆中血小板数的比值(相当于聚集后沉淀的血小板数与总的血小板数之比)，即反映血小板的集聚程度。2.3统计学处理所有数据均以(x±s)表示，并进行t检验统计分析。3结果3.1热盛胃出血小鼠模型制作成功Ⅱ组每只小鼠的胃黏膜出血点为23.5±3.75个，Ⅰ组每只小鼠胃出血点仅0.6±0.7个，两者有极明显差异，P0.01;Ⅰ组血小板积聚率45.57±7.31%Ⅱ组血小板积聚率32.49±5.94%，Ⅱ组与Ⅰ组比较明显

7、下降，P0.01。3.2不同浓度的墨旱莲水煎剂对热盛胃出血小鼠模型均有明显止血作用，且有计量依赖性表1墨旱莲水煎剂对热盛胃出血小鼠模型的止血作用注:与Ⅱ组比较，#P0.05,**P0.01。4讨论在临床上消化道出血是常见病和多发病。胃出血是消化道出血中最常见的病症。本实验以等量的附子、干姜、肉桂、党参、黄芪、辣椒制成的水煎剂，给小鼠灌胃，并注射消炎痛，灌服乙醇。因为等量的附子、干姜、肉桂、党参、黄芪、辣椒制成的水煎剂，属热药，给小鼠灌胃后，小鼠已处在热盛状态。《内经》记载“阳热过剩可迫血妄行。”消炎痛类药最大的副作用是诱发上消化道出血，过

8、量饮酒也可以诱发胃出血。因此在热盛胃出血模型药、消炎痛和乙醇的共同作用下，结果由表1可见，Ⅱ组与Ⅰ组相比胃黏膜出血点极显著增加(P0.001)，血小板积聚率明显下降(P0.01)。同时凝血酶原