闪式提取银杏叶中萜类内酯的工艺研究论文

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1、闪式提取银杏叶中萜类内酯的工艺研究论文王平，陈丹龙，朱兴一，忙怡丽，苏为科【摘要】目的研究用闪式提取器从银杏叶中提取银杏萜类内酯的工艺。方法用正交实验进行提取方法的研究，用高效液相色谱（HPLC）法测定银杏内酯的含量，流动相为甲醇-水(30∶70)，流速为0.8ml/min.freelin，乙醇浓度60%，液固比20∶1，此条件下萜类内酯提取率平均值可达1.712mg/g。结论闪式提取是一种有效的提取银杏萜类内酯的方法。【关键词】闪式提取；银杏叶；萜类内酯银杏GinkgobilobaL.为银杏科银杏属植物，又名公孙树，为现存古代孑遗植物之一，是我国的特产植物［1］。银杏叶中主要含有银杏内酯以及

2、黄酮类等化合物，具有益心敛肺、化湿止泻等作用。银杏内酯作为银杏叶的提取物具有抗凝血、防治动脉粥样硬化、保护缺血损伤组织、抗休克、抗炎等诸多药理作用，能有效的抑制多种诱导剂所诱导的血小板聚集，并且银杏内酯已被认为是高效特异的PAF拮抗剂［2～4］。银杏内酯主要包括银杏内酯A，B，C和白果内酯，简称为GA，GB，GC，BB。目前，对于银杏内酯的提取，主要采用的是乙醇溶液加热回流的方法。YangChun等［5］尝试采用超临界二氧化碳法提取银杏内酯，虽然提取效果较好，但由于操作繁琐，设备成本高，本方法目前并未得到广泛的应用。近年来，闪式提取技术是利用高速机械剪切力和搅拌力，迅速破坏植物细胞组织，使组织

3、细胞内部的有效成分与溶剂充分接触，使有效成分快速溶解［6，7］，应用该方法对氨基酸、蛋白质、萜类和黄酮类化学物等物质的提取已有文献报道，表明其具有缩短提取时间，提高提取效率，简化操作步骤的特点，但将此方法应用到银杏叶中银杏内酯的提取的研究尚未见文献报道。本文报道用闪式提取技术提取银杏叶中银杏内酯，取影响闪式提取的主要因素即粒径大小、提取时间、乙醇浓度和液固比4个因素，各取3个水平进行L9(34)正交实验，用液相色谱法检测银杏内酯提取率，并以此为评价指标，确定最佳工艺条件。1器材1.1材料与试剂银杏叶由浙江康恩贝制药股份有限公司提供；银杏萜类内酯（白果内酯及银杏内酯A、B、C）标准品购自中国药品

4、生物制品检定所；HPLC甲醇为色谱纯试剂；乙醇为分析纯试剂。1.2仪器DFY-500摇摆式粉碎机（上海鼎广机械设备有限公司制造）；DZF真空干燥箱（上海精宏实验设备有限公司制造）；RE-52AA旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂制造）；FSH22可调闪式提取器(郑州金星科技有限公司制造)；)C18(250mm×4.6mm,5μm)；流动相为甲醇-水(30∶70)，流速0.8ml/min；蒸发光散射检测器（ELSD）：漂移管温度104℃，载气流速2.9ml/min；柱温为30℃。表1因素水平（略）2.3线性范围考察分别精密称取对照品GA，GB，GC，BB各3，3，3，4mg置于10ml量瓶中甲醇加至

5、刻度，摇匀即得混合对照品溶液，取5，2.50，0.50，0.25，0.05ml,分别置于10ml量瓶中加甲醇到刻度，摇匀，即得混合对照品溶液,分别吸取溶液20μl，注入HPLC仪测定。以对照品浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，进行线性回归。2.4样品溶液的制备取实验得到浸膏，加10ml水和1滴2%盐酸，用醋酸乙酯振摇萃取4次（15，10，10，10ml）。合并后用5%醋酸钠20ml洗涤，洗涤液用10ml醋酸乙酯萃取，合并醋酸乙酯萃取液后用水洗涤两次，20ml/次。合并水层，用10ml醋酸乙酯萃取，合并醋酸乙酯萃取液，回收醋酸乙酯后加10ml甲醇，用于进样。2.5精密度实验取最小浓度

6、对照品溶液，重复进样5次，记录色谱峰面积，计算RSD。2.6重复性实验精密称取同批银杏叶粉末40g，共5份，按“样品溶液的制备”项下方法操作，制备样品溶液6份，进行含量测定，计算RSD。2.7稳定性实验取一个样品，每隔2h进样1次，共进样5次，考察供试品溶液的稳定性。2.8回收率实验取已测知含量的样品5份，分别精密加入对照品适量，依HPLC法测定，计算回收率，RSD。2.9最佳工艺验证按照优化工艺条件操作，测定银杏萜类内酯含量。3结果3.1HPLC结果及标准品线性关系在前述色谱条件下，各种银杏内酯能够很好地分离(见图1)，以对照品浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，进行线性回归。回归

7、方程为：白果内酯Y=0.56312X-2.56732，R=0.998；银杏内酯AY=0.34856X-3.15764，R=0.997；银杏内酯BY=0.45678X-4.45624，R=0.997；银杏内酯CY=0.32355X-3.23413，R=0.999。3.2闪式提取银杏萜内酯正交实验结果在本实验范围内见表2，各因素对提取效果的影响程度依次为：A（颗粒大小）B（提取时间）C（乙醇浓度）D（