反相高效液相色谱法测定冬凌草中乌索酸和齐墩果酸的含量论文

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1、反相高效液相色谱法测定冬凌草中乌索酸和齐墩果酸的含量论文【摘要】目的建立反相高效液相色谱（RPHPLC）法测定冬凌草中乌索酸和齐墩果酸的含量。方法色谱柱为NUCLEODURC18RP柱(250mm×4.6mm,5μm)；流动相为甲醇水(87∶13)；流速0.8ml·min-1，光电二极管阵列检测器，检测波长210nm，柱温25℃。结果在选定色谱条件下线性范围良好，乌索酸和齐墩果酸的样品加样回收率分别为96.2%和98.7%，RSD为1.9%和0.9%。结论该方法快速简便，结果准确可靠。【关键词】冬凌

2、草；乌索酸；齐墩果酸；反相高效液相色谱；含量测定基金项目：国家“863”计划重点资助项目Abstract：ObjectiveTodevelopaquantitativemethodfordeterminationofursolicacidandoleanolicacidinRabdosiarubescensbyRPHPLC.MethodsHPLCn(4.6mm×250mm,5μm)at25℃usingmethanolobilephasel·min-1anddetection.ResultsThego

3、odlinearrelationshipumconditions.Therecoveriesofthestandardsaddedforursolicacidandoleanolicacidethodisrapidandprecise.Keyination冬凌草为唇形科香茶菜属植物碎米亚Rabdosiarubescens(Hemsl.)Hara的干燥全草，广布于黄河、长江流域.freelposl.)Hara的干燥叶和地上部分。2方法与结果2.1溶液的制备2.1.1对照品混合溶液的配制精密称取乌索酸和齐墩

4、果酸对照品3.22mg和1.28mg，置50ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，配制成对照品混合溶液，备用。2.1.2样品溶液的配制取冬凌草样品于60℃恒温干燥8h，粉碎，精密称取约3g，加入95%乙醇溶液40ml，超声提取120min，冷却至室温，滤过，滤渣洗涤2次，合并滤液于50ml容量瓶中，乙醇定容，摇匀，经0.45μm微孔滤膜过滤，得样品溶液。2.2检测波长的确定取乌索酸和齐墩果酸对照品混合溶液进样，在190～500nm波长范围进行光谱扫描，其在流动相中的最大吸收波长均为203.4nm(

5、图1)，但由于流动相在短波长处有末端吸收，为了减少干扰，提高信噪比，提取不同波长的色谱图进行比较，选择210nm为检测波长信噪比高，峰形好，基线平稳［6］。2.3色谱条件色谱柱为NUCLEODURC18RP柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相为甲醇水（87∶13，V/V）；流速0.8ml·min-1；检测波长210nm；柱温25°C，进样量10μl。乌索酸和齐墩果酸理论塔板数均大于10000，分离度大于1.5。乌索酸和齐墩果酸对照品混合溶液及冬凌草样品溶液的HPLC色谱见图1。图1乌索酸和齐墩

6、果酸对照品紫外光谱（略）2.4线性关系实验分别精密吸取对照品混合溶液1.0，5.0，10.0，15.0，20.0μl，按选定的色谱条件进样并测定峰面积。以峰面积（μV·s）对进样量（μg）进行线性回归，乌索酸和齐墩果酸的回归方程分别为：YUA=1.12×105X+3.68×103，r=0.9996，YOLA=1.35×105X+2.11×103，r=0.9995表明当乌索酸进样量在0.0644～1.288μg，齐墩果酸进样量在0.0256～0.512μg时，线性关系良好。2.5仪器精密度实验精密吸取乌索

7、酸和齐墩果酸对照品混合溶液10μl进样，重复5次，测得乌索酸峰面积的相对标准偏差（RSD）为0.6%（n=5），齐墩果酸的峰面积RSD为0.9%（n=5），表明仪器精密度良好。2.6方法重现性实验精密称取冬凌草样品5份，按上述方法配制样品溶液，精密吸取10μl进样分析，测得乌索酸含量的RSD为1.6%（n=5），齐墩果酸含量的RSD为2.2%(n=5)，表明方法重现性好。2.7加样回收率实验精密称取已知乌索酸和齐墩果酸含量的冬凌草药材6份，每组两份，按高，中，低3种浓度分别加入适量乌索酸和齐墩果酸对照品

8、，制备样品溶液，进样分析，乌索酸和齐墩果酸平均加样回收率分别为96.2%和98.7%，RSD为1.9%和0.9%。a.对照品b.样品1-齐墩果酸2-乌索酸图2对照品和样品的HPLC谱图（210nm）（略）2.8样品中乌索酸和齐墩果酸含量测定精密称取不同批次的冬凌草样品约3g，制备样品溶液。精密吸取样品溶液10μl，分别进样，平行实验3次，测定乌索酸和齐墩果酸峰面积，外标法计算平均含量。结果见表1。表1样品中乌索酸和齐墩果酸的测定结果（略）3