车前草中乌索酸和齐墩果酸含量的反相高效液相色谱法测定

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1、车前草中乌索酸和齐墩果酸含量的反相高效液相色谱法测定【关键词】车前草；,,乌索酸；,,齐墩果酸；,,高效液相色谱法　　摘要：目的采用反相高效液相色谱（RP-HPLC）法测定车前草中主要成分乌索酸和齐墩果酸的含量。方法采用高效液相色谱法。使用Nova-PakC18柱（3.9mm×300mm，4μm)，流动相为甲醇：水(88：12，V/V)，流速为0.8ml/min，检测波长为210nm，柱温25℃。结果乌索酸在0.456~4.104μg范围内呈良好的线性关系(r=0.9997)，平均回收率为98.2%，RSD=1.1%；齐墩果酸在0

2、.156~1.384μg范围内呈良好的线性关系(r=0.9996)，平均回收率为101.6％，RSD=1.7％。结论方法灵敏、准确、专属性强，重现性好，可作为车前草药材的质量控制方法。　　关键词：车前草；乌索酸；齐墩果酸；高效液相色谱法　　DeterminationofUrsolicAcidandOleanolicAcidinPlantagoasiaticaL.byRP-HPLC　　Abstract:ObjectiveToestablishamethodfordeterminingursolicacidandoleanolicac

3、idinPlantagoasiaticaL.byhighperformanceliquidchromatography.MethodsTheseparationn（3.9mm×300mm,4μm)ethanol-obilephase，ataflol/min.Thedetection.Thecolumnethodissensitive,accurateandspecificm×300mm，4μm，B-10D高纯水机（杭州永洁达膜分离设备厂）；FC204N电子分析天平(上海天平仪器厂)；202-26A型数显电热恒温干燥箱（上海阳光实验

4、仪器有限公司），KS-150超声提取仪器(宁波科盛仪器厂)。　　1.2试药甲醇为色谱纯（上海陆忠试剂厂），水为高纯水，95%乙醇(分析纯，江西同盟试剂化工厂）。乌索酸和齐墩果酸对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号：110742-200314，110709-200311，供含量测定用)。车前草购于江西省宜春市药材市场，经本所天然药物研究室鉴定为车前PlantagoasiaticaL.的干燥全草。　　2方法与结果　　2.1色谱条件色谱柱：Nova-PakC18柱(3.9mm×300mm，4μm，带保护柱)；流动相为甲醇：水（88：

5、12，V/V)，流速为0.8ml/min；柱温为25℃；检测波长为210nm。以美国药典方法计算，乌索酸和齐墩果酸理论塔板数均大于9000。乌索酸和齐墩果酸对照品及车前草样品的HPLC色谱见图1。　　图1高效液相色谱图（略）　　2.2对照品溶液的配制精密称取干燥至恒重的乌索酸对照品22.8mg和齐墩果酸对照品7.8mg，置于10ml容量瓶中，加入适量甲醇溶解，用甲醇定容，得对照品储备液。精密吸取1ml储备液置10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，混合均匀，制成乌索酸和齐墩果酸的浓度分别为0.228μg/μl和0.078μg/μl对照

6、品混合溶液，备用。　　2.3样品溶液的制备将车前草样品置烘箱中90℃烘干12h，研细后精密称取约4g，置于具塞三角烧瓶中，加入10倍量95%乙醇，采用超声法提取60min，过滤，药渣洗涤两次，合并滤液于50ml容量瓶中，加乙醇定容至刻度，摇匀。滤液用0.2μm的滤膜过滤，得车前草提取物的样品溶液。　　2.4线性范围实验分别精密吸取对照品的混合溶液2.0，6.0，10.0，14.0，18.0μl进样分析，按2.1所述色谱条件测定峰面积，以对照品的进样量(μg)为横坐标，以峰面积（μV・s）为纵坐标，进行线性拟合，乌索酸

7、和齐墩果酸的回归线方程分别为：Y乌索酸=5.18×105X-4.36×104(r=0.9997)，Y齐墩果酸=6.21×105X-6.32×104(r=0.9996)。表明当乌索酸进样量在0.456~4.104μg，齐墩果酸进样量在0.156~1.384μg范围内线性关系良好　　2.5精密度实验精密吸取对照品混合溶液10μl，重复进样5次，分别测定峰面积值，计算得乌索酸的RSD为0.9%，齐墩果酸的RSD为0.7%，进样方法和仪器精密度良好。　　2.6重复性实验取干燥至恒重的同一批车前草样品5份，按样品溶液制备方法制备样品溶液。精

8、密吸取10μl进样分析，乌索酸峰面积RSD为2.1%，齐墩果酸峰面积RSD为2.3%。　　2.7加样回收率实验精密称取干燥至恒重、已知乌索酸和齐墩果酸含量的车前草样品5份，每份约4g，加入适量乌索酸和齐墩果酸对照品适量，5份样品同时按样品溶液制备方