反相高效液相色谱法同时测定马鞭草中乌索酸和齐墩果酸的含量

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1、反相高效液相色谱法同时测定马鞭草中乌索酸和齐墩果酸的含量【摘要】　　目的建立RP-HPLC法测定马鞭草中乌索酸和齐墩果酸的含量。方法色谱柱为NucleosilC18柱（4.6mm×250mm,5μm），流动相为甲醇-水(88∶12,V/V)，流速为0.8ml/min，检测波长为210nm，柱温25℃。结果乌索酸在0.458～4.109μg范围内呈良好的线性关系(r=0.9997)，平均回收率为98.1%，RSD=1.1%；齐墩果酸在0.156～1.389μg范围内呈良好的线性关系(r=0.9996)，平均回收率为101.7%，RSD=1.7%。结论方法快速简便、准确可靠，可作为马鞭草药

2、材的质量控制方法。【关键词】马鞭草；乌索酸；齐墩果酸；反相高效液相色谱法　　Abstract：ObjectiveToestablishamethodfordeterminingursolicacidandoleanolicacidinVerbenaofficinalisL.byhighperformanceliquidchromatography.MethodsTheseparationn(4.6mm×250mm,5μm)ethanol-obilephase.Theflol/minandthedetection.Thecolumnethodisrapid,simple,accurate

3、andreliableandcanbeusedforthequalitycontrolofVerbenaofficinalisL.．　　Keypom×250mm,5μl,带保护柱)；流动相为甲醇-水（88∶12，V/V）；流速为0.8ml/min；柱温为25℃；检测波长为210nm；以《美国药典》方法计算，乌索酸和齐墩果酸理论塔板数均大于10000。乌索酸和齐墩果酸对照品及马鞭草样品的HPLC色谱见图1。　　2.2对照品溶液的配制精密称取干燥至恒重的乌索酸对照品22.8mg和齐墩果酸对照品7.8mg，置于10ml容量瓶中，加入适量甲醇溶解，用甲醇定容，得对照品储备液。精密吸取1ml混合

4、液置10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，混合均匀，制成乌索酸和齐墩果酸的浓度分别为0.228μg/μl和0.078μg/μl对照品混合溶液，备用。　　2.3样品溶液的制备将马鞭草样品置烘箱中85℃烘干12h，研细后精密称取约4g，置于具塞三角烧瓶中，加入10倍量95%乙醇，采用超声法提取60min，过滤，药渣洗涤两次，合并滤液于50ml容量瓶中，加乙醇定容至刻度，摇匀。滤液用0.2μm的滤膜过滤，得马鞭草提取物的样品溶液。　　2.4线性关系实验分别精密吸取对照品的混合溶液2.0，6.0，10.0，14.0，18.0μl进样分析，按选定的色谱条件进样并测定峰面积。以峰面积（μV·s）对进

5、样量(μg)进行线性回归，乌索酸和齐墩果酸的回归线方程分别为：　　YUA=5.18×105X-4.36×104（r=0.9997）YOLA=6.21×105X-6.32×104（r=0.9996）表明当乌索酸进样量在0.458～4.109μg，齐墩果酸进样量在0.156～1.389μg范围内线性关系良好。　　2.5精密度实验精密吸取对照品混合溶液10μl，重复进样5次，分别测定峰面积值，计算出乌索酸的RSD为0.9%，齐墩果酸的RSD为0.7%，进样方法和仪器精密度良好。　　2.6重复性实验取干燥至恒重的同一批马鞭草样品5份，按样品溶液制备方法制备样品溶液。精密吸取10μl进样分析，乌

6、索酸RSD为2.1%，齐墩果酸峰面积RSD为2.3%。　　2.7加样回收率实验精密称取干燥至恒重、已知乌索酸和齐墩果酸含量的马鞭草样品5份，每份约4g，加入适量乌索酸和齐墩果酸对照品适量，5份样品同时按样品溶液制备方法提取，进样分析。乌索酸平均回收率为98.1%，RSD1.1%，齐墩果酸平均回收率为101.7%，RSD1.7%。　　2.8样品的含量测定精密吸取马鞭草样品溶液10μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，外标法计算样品中乌索酸和齐墩果酸的含量。结果见表1。表1马鞭草提取物中乌索酸和齐墩果酸含量（略）　　3讨论　　3.1提取方法从中草药中提取有效成分的常规方法主要有：热回流

7、法、索氏法、煎煮法及渗滤法、冷热浸泡法等［4］。本文采用的超声提取法在提取过程中具有破坏植物药材细胞的作用，加速溶媒渗透到药材细胞中，使药材的化学成分易溶于溶媒中［5］。它与常规提取方法相比，具有提取时间短，产率高，降低溶剂消耗，节约能源的优点。　　3.2提取时间样品加入10倍量95%乙醇溶液，分别超声提取45，60，90，120，150min，预处理后测定提取液中乌索酸含量，60min后乌索酸含量无明显变化，表明其成分提取完全，乌索酸平均加样