bfgf对关节软骨缺损的修复作用

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1、bFGF对关节软骨缺损的修复作用作者：司全明侯筱魁毛宾尧【摘要】目的观察碱性成纤维细胞生长因子对关节软骨缺损修复的影响。方法在兔双侧股骨髁间窝造成骨软骨缺损，一侧应用碱性成纤维细胞生长因子，另一侧作对照。术后3个月，利用组织切片及扫描电镜等方法，观察两侧骨软骨缺损修复情况。结果修复3个月后，对照侧软骨缺损难以完全修复，修复细胞形态多样，似成纤维细胞，蛋白多糖颗粒较少。应用碱性成纤维细胞生长因子侧软骨缺损基本修复，修复细胞似软骨细胞，有较多的蛋白多糖颗粒与胶原纤维结合。缺损修复组织评分，碱性成纤维细胞生长因子组优于对照组。结论碱性成纤维细胞生

2、长因子可促进骨软骨缺损的修复。【关键词】碱性成纤维细胞生长因子软骨缺损修复　　EffectsofbFGFonArticularCartilageDefectAbstract：ObjectiveToexploretheeffectofbasicfibroblastgrouronthsfolloethods，suchastransmissionelectronmicroscopy(TEM)，scanningelectronicmicroscopy(SEM)ilartofibrolblastcells.Theamountofproteoglyca

3、nilartochondrocytes.Thetotalscoresonthehistologicalgradingscaleaybecouldimprovetherepairofcartilagedefect.KeyL/kg耳缘静脉注射麻醉。麻醉后，兔仰卧位，膝关节屈曲，小腿固定在自制的固定架上。双侧膝关节前方剪毛，常规消毒、铺巾。取髌韧带内侧切口，显露股骨髁间窝。在股骨髁间窝造成表面为4mm×3mm的骨软骨缺损。用0.25％氯霉素及生理盐水冲洗后，在bFGF组骨软骨缺损部，放入浸有bFGF(1μg的bFGF溶于1mL％透明质酸钠，Sig

4、ma公司)的明胶海绵一块，约4.5mm×3.5mm大小。对照组缺损部放同样大小仅浸有1％透明质酸钠的明胶海绵一块，无bFGF，缝合切口。术前1h及术后3d，肌注青霉素80万单位。动物放于笼中常规饲养，于术后4d和8d膝关节分别再注射一次，bFGF组注射1μgbFGF(1μg的bFGF溶于1mL1％透明质酸钠)，对照组膝关节注射透明质酸钠1mL。术后3个月经耳缘静脉注射空气处死动物。取股骨髁标本进行扫描电镜及组织切片行形态学等观察。　　1.2组织切片光镜观察　　bFGF组和对照组分别取8个标本，标本经磷酸缓冲液清洁，用40g/L的多聚甲醛PB

5、S固定48h。修整标本后，在100g/L的乙二胺四乙酸中脱钙。每周换液一次，利用针刺法确定脱钙情况，6～7周脱钙彻底后，于软骨缺损中部横行切断，每一标本分为2部分，一部分用于组织切片光镜观察，一部分用于扫描电镜观察。组织切片观察标本经流水冲洗后，乙醇逐级脱水透明，石蜡包埋，连续5μm切片，常规HE染色，OlympusBH2显微镜下观察，并进行组织学评分。　　1.3扫描电镜观察　　扫描电镜，标本置2％戊二醛磷酸缓冲液中固定24h(4℃)，用10g/L四氧化锇固定2h，乙醇逐级脱水，临界点干燥后，黏附于载物台上，真空喷金，环境扫描电镜(XL3

6、0，ESEM)观察关节表面的情况。　　1.4透射电镜观察　　bFGF组和对照组分别取4个标本，于软骨缺损局部取修复组织，软骨修复组织放入2％戊二醛磷酸缓冲液中(含0.2％钌红)，置4℃冰箱中固定48h。将标本修整为宽约1.0mm的长条形，PBS漂洗；1％的四氧化锇固定2h，再PBS漂洗；乙醇逐级脱水，环氧树脂包埋，超薄切片；醋酸双氧铀与柠檬酸铅双重染色；Hitachi600透射电镜观察软骨修复细胞及胶原纤维上蛋白多糖颗粒的变化。　　2结果　　2.1光镜观察　　对照组缺损局部只有部分修复组织，关节面不平整，修复细胞排列紊乱(见图1)。bFG

7、F组修复软骨组织与周围软骨平齐，关节表面较平整，修复细胞密度较高，排列较为杂乱(见图2)。利用Sellers等［1］对骨软骨缺损修复组织的评分标准进行评定，Sellers对骨软骨修复组织的评分标准包括缺损的修复程度、修复细胞形态、修复组织与临近软骨组织的整合、修复组织表面情况，软骨下骨形成情况及潮标形成情况等8方图2术后3个月，bFGF组关节软骨缺损能修复，关节面基本平整(HE，×100)面，最低0分，最高31分。分数越低，表明修复组织质量越好。应用bFGF侧为10.7±3.6，未用bFGF侧为18.4±4.1，两组间t检验P＜0.05，表

8、明bFGF组优于对照组。　　2.2透射电镜观察　　对照组修复细胞形态多样，似成纤维细胞，胶原纤维上蛋白多糖颗粒较少(见图3)。bFGF组修复细胞似软骨细胞，有较多的蛋白多糖颗粒与