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1、地锦草不同萃取部位体外抗真菌作用研究论文.freelinetheantifungaleffectofdifferentextractionpartsofEuphorbiahumifusainvitro,andmeasuretheminimuminhibitionconcentrations(MICs).MethodsSeparatedtheDijincaoextractandgotfourpartsbysolventextraction.AppliedthestandarditteeforClinicalLaboratoryStandards(NCC
2、LS)：ReferenceMethodforBrothDilutionAntifungalSusceptibilityTestingofFilamentous,Fungi(M38-A).MICsofdifferentpartsofDijincaoextractagainst23strainsofmonclinicaldermatophytesextractandpetroleumetherextractcouldnotgetclearanddefiniteMICbecausetheirsolubilitydisturbedthedeterminati
3、onofexperiment’sresults.Hoifusaextractpartshaveantifungnalactivityagainstdermatophytesinvitro.Keyifusaextractparts;M38-A;antifungaleffect;invitro;MIC地锦草,维吾尔名为夏塔热其尼(Xiahatereqini)、雅丽蔓(Yalmankulake),为大戟科植物地锦Euphorbiahumifusa38-A)4,探讨其各部位的体外抗真菌活性。1材料与方法1.1药物地锦草药材由新疆维吾尔医药研究所药剂室提供,经
4、生药学鉴定为大戟科植物地锦草(EuphorbiahumifusaI-1640培养基,美国Sigma公司;三氮吗啡琳丙磺酸(MOPS),美国Sigma公司;沙堡氏琼脂培养基(SDA),批号20080228,北京奥博星生物科技有限公司。RPMI-1640培养基的配制：将10.4gRPMI-1640和34.53gMOPS粉末溶于900mL蒸馏水中,用1mol/LNaOH溶液调整其pH至7.0(25℃),加蒸馏水定容至1L,G-6漏斗滤过灭菌,存于4℃冰箱备用。SDA培养基的配制：称取PDA粉末67g,加入1000mL蒸馏水,摇匀加热煮沸溶解,121℃高压灭
5、菌20min,分装,4℃保存,备用。1.4仪器BHC-1300ⅡA型生物安全柜,苏州安泰空气技术有限公司;FMspx-250B型生化培养箱,上海福玛试验设备有限公司;LeicaDM-2500型显微镜,德国。1.5地锦草不同部位的提取分离方法取地锦草全草10kg,粉碎,加70%乙醇回流提取2次(8、6倍),每次2h,药渣加水煎煮提取1次(10倍,2h),分别滤过,合并醇提液,减压回收至流浸膏状(相对密度1.1,热测),另水提液减压回收至流浸膏状(状态同上)。合并以上醇提及水提浸膏(体积约5～10L,若粘稠可加水稀释),依次用石油醚、氯仿、正丁醇萃取,每
6、种有机溶剂萃取5次,合并有机溶剂萃取液,分别将各有机溶剂萃取液及萃取后的水相减压回收至干,分别得到石油醚、氯仿、正丁醇及水相4个溶剂萃取部位,称重,粉碎,即得。1.6最低抑菌浓度测定根据NCCLS推荐的《产孢丝状真菌的液基稀释法抗真菌药物敏感性试验方案》(M38-A)4,测定地锦草不同萃取部位对23株皮肤癣菌的最低抑菌浓度值(MIC)。1.6.1抗真菌药物储备液、稀释液的制备称取地锦草各萃取部位分别为204.8mg,用1mL二甲基亚砜(DMSO)溶解,制成浓度为204800μg/mL的储备液,存于-20℃冰箱备用;称取TBF8mg,用1mLDMSO溶
7、解,制成浓度为8000μg/mL的储备液。从中吸取1μL加RPMI-1640培养基499μL,使之稀释500倍,此时,TBF储存液浓度为16μg/mL,存于-20℃冰箱备用。将地锦草各萃取部位储备液、TBF储备液分别用RPMI-1640培养基倍比稀释成2倍终浓度。地锦草的2倍终浓度由高到低依次为：2048、1024、512、256、128、64、32、16、8、4μg/mL;TBF的2倍终浓度由高到低依次为：0.16、0.08、0.04、0.02、0.01、0.005、0.0025、0.00125、0.000625、0.0003125μg/mL。1.
8、6.2菌接种液的制备①皮肤癣菌：将受试的皮肤癣菌接种于SDA上,26℃培养7～14d。吸取2mL无菌的0.8
