muc1 mrna和cd44 mrna在非小细胞肺癌组织中的表达及与预后的关系论文

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1、Muc1mRNA和CD44mRNA在非小细胞肺癌组织中的表达及与预后的关系论文吴勇李光虎刘国津尹光浩刘伟【摘要】目的探讨Muc1mRNA和CD44mRNA在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达情况与淋巴结转移的相关性及其与预后的关系。方法应用RTPCR方法检测36例NSCLC组织中和10例正常肺组织中Muc1mRNA和CD44mRNA的表达情况。结果①36例NSCLC组织中有19例Muc1mRNA阳性表达,阳性表达率为52.7%；21例CD44mRNA表达，阳性表达率为58.3%。②Muc1mRNA在NSCLC

2、组织中的阳性表达与患者的年龄、性别、组织学类型、TNM分期、肿瘤大小无关（P＞0.05），与淋巴结转移有关(χ2=10.166,Ｐ＜0.05)；CD44mRNA在NSCLC组织中的阳性表达与患者的年龄、性别、组织学类型、TNM分期、肿瘤大小无关（P＞0.05），与淋巴结转移有关(χ2=8.371,Ｐ＜0.05)。③Muc1mRNA和CD44mRNA阳性表达与NSCLC患者的预后有关(Ｐ＜0.05)。④Muc1mRNA和CD44mRNA在NSCLC组织中表达成正相关(r=0.442,Ｐ＜0.05)。结论Muc1mRNA和

3、CD44mRNA阳性表达的NSCLC患者淋巴结转移率高，对NSCLC患者预后判断具有一定的指导作用。【关键词】Muc1；CD44；非小细胞肺癌；预后Muc1黏蛋白是一种高分子量糖蛋白，在上皮细胞来源的恶性肿瘤中有异常表达，在肿瘤的生长、侵润、发展及转移中有重要作用〔1〕。CD44蛋白是一种细胞膜表面跨膜糖蛋白，又称透明质酸受体.freelRNA和CD44mRNA联合检测在肺癌中的研究尚无报道。本实验采用RTPCR方法,检测非小细胞肺癌(NSCLC)手术切除标本和正常肺组织中Muc1mRNA和CD44mRNA的表达,分

4、析Muc1mRNA与CD44mRNA与肺癌淋巴结转移的相关性,探讨其对于临床肺癌判断预后的价值。1材料与方法1.1标本来源我科2002年1月1日至2003年7月30日手术切除的NSCLC冰冻标本36例，术前均未行放疗及化疗。男性28例，女性8例。年龄43～73岁，中位年龄63.5岁，其中腺癌19例,鳞癌13例,鳞腺癌4例。选择正常肺组织(远离癌组织)10例作为阴性对照。淋巴结转移、组织学类型、肿瘤大小均依据术后病理回报，TNM分期依据1997年国际抗癌联盟新修订的肺癌TNM分期。1.2主要试剂RNA提取试剂盒、逆转录酶购于

5、GibcoBRL公司;脱氧核糖核酸酶、TaqDNA聚合酶、dNTP和DNALadderMarker购于Promega公司。1.3取材方法36例NSCLC患者手术切除肺癌组织及10例阴性对照正常肺组织，用锡箔纸包裹标号，投入液氮中1min速冻，然后放置于-80℃冰箱内保存。1.4RTPCR法灵敏度实验分别将正常肺组织100ng与3mlDEPC处理水混合后匀浆,用FicollHypaque分离液密度梯度离心。镜下细胞记数,将其调整为数量级为107的细胞悬液各10份,将肺癌细胞(LC5细胞株)连续稀释为以下各数量级的细胞悬液

6、:105、104、103、102、10、1、1、1、1、1。将以上2类细胞悬液分别混合制成代表不同浓度的混合液,.freelRNA和CD44mRNA表达半定量实验将观察组36例肺癌组织匀浆,取细胞,调整为数量级107的细胞悬液,每份样品连续稀释为以下各数量级的细胞悬液:105、104、103、102。分别提取RNA,进行RTPCR扩增并作琼脂糖凝胶电泳分析。1.6总ＲＮＡ的提取按Chomczynski一步法提取每例肺癌冰冻组织的总RNA，紫外分光光度计测量，判定所提取RNA的纯度，要求光密度值A260/A280＞1.7。将

7、RNA溶液置-80℃冰箱保存。取2μlRNA溶液于2%琼脂糖凝胶进行电泳。阴性对照肺组织ＲＮＡ的提取步骤同上述冰冻组织RNA的提取。1.7引物Muc1mRNA和CD44mRNA引物由北京奥科生物技术有限责任公司合成。根据Noguchi的基因序列设计Muc1引物序列:正义5′CGTCGTGGACATTGATGGTAC3′，反义5′GGTACCTCCTCTCACCTCCTCCAA3′，扩增片段为524bp。根据choi的基因序列设计CD44引物序列：正义5′ACAACTGGTGATGGAGACTCATCC3′，反

8、义5′CAGAGTGGCTTATCATCTTGG3′，扩增片段为546bp。内参βactin引物序列为：正义5′TGGAATCCTGTGGCATCCATGAAAC3′，反义5′TAAAACGCAGCTCAGTAACAGTCCG3，片段大小为320bp。1.8RTPCR和琼脂