muc1 mrna和cd44 mrna在非小细胞肺癌组织中的表达及与预后的关系

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1、Muc1mRNA和CD44mRNA在非小细胞肺癌组织中的表达及与预后的关系作者：吴勇李光虎刘国津尹光浩刘伟【摘要】目的探讨Muc1mRNA和CD44mRNA在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达情况与淋巴结转移的相关性及其与预后的关系。方法应用RTPCR方法检测36例NSCLC组织中和10例正常肺组织中Muc1mRNA和CD44mRNA的表达情况。结果①36例NSCLC组织中有19例Muc1mRNA阳性表达,阳性表达率为52.7%；21例CD44mRNA表达，阳性表达率为58.3%。②Muc1mRNA在NSCL

2、C组织中的阳性表达与患者的年龄、性别、组织学类型、TNM分期、肿瘤大小无关（P＞0.05），与淋巴结转移有关(χ2=10.166,Ｐ＜0.05)；CD44mRNA在NSCLC组织中的阳性表达与患者的年龄、性别、组织学类型、TNM分期、肿瘤大小无关（P＞0.05），与淋巴结转移有关(χ2=8.371,Ｐ＜0.05)。③Muc1mRNA和CD44mRNA阳性表达与NSCLC患者的预后有关(Ｐ＜0.05)。④Muc1mRNA和CD44mRNA在NSCLC组织中表达成正相关(r=0.442,Ｐ＜0.05)。结论Muc1mRNA

3、和CD44mRNA阳性表达的NSCLC患者淋巴结转移率高，对NSCLC患者预后判断具有一定的指导作用。【关键词】Muc1；CD44；非小细胞肺癌；预后Muc111黏蛋白是一种高分子量糖蛋白，在上皮细胞来源的恶性肿瘤中有异常表达，在肿瘤的生长、侵润、发展及转移中有重要作用〔1〕。CD44蛋白是一种细胞膜表面跨膜糖蛋白，又称透明质酸受体，在许多人类肿瘤中均有过量表达，与肿瘤的发生、发展密切相关〔2〕。目前国内Muc1mRNA和CD44mRNA联合检测在肺癌中的研究尚无报道。本实验采用RTPCR方法,检测非小细胞肺癌(NS

4、CLC)手术切除标本和正常肺组织中Muc1mRNA和CD44mRNA的表达,分析Muc1mRNA与CD44mRNA与肺癌淋巴结转移的相关性,探讨其对于临床肺癌判断预后的价值。1材料与方法1.1标本来源我科2002年1月1日至2003年7月30日手术切除的NSCLC冰冻标本36例，术前均未行放疗及化疗。男性28例，女性8例。年龄43～73岁，中位年龄63.5岁，其中腺癌19例,鳞癌13例,鳞腺癌4例。选择正常肺组织(远离癌组织)10例作为阴性对照。淋巴结转移、组织学类型、肿瘤大小均依据术后病理回报，TNM分期依据1997年

5、国际抗癌联盟新修订的肺癌TNM分期。1.2主要试剂RNA提取试剂盒、逆转录酶购于GibcoBRL公司;脱氧核糖核酸酶、TaqDNA聚合酶、dNTP和DNALadderMarker购于Promega公司。111.3取材方法36例NSCLC患者手术切除肺癌组织及10例阴性对照正常肺组织，用锡箔纸包裹标号，投入液氮中1min速冻，然后放置于-80℃冰箱内保存。1.4RTPCR法灵敏度实验分别将正常肺组织100ng与3mlDEPC处理水混合后匀浆,用FicollHypaque分离液密度梯度离心。镜下细胞记数,将其调整为数量级为1

6、07的细胞悬液各10份,将肺癌细胞(LC5细胞株)连续稀释为以下各数量级的细胞悬液:105、104、103、102、10、1、1、1、1、1。将以上2类细胞悬液分别混合制成代表不同浓度的混合液,分别提取RNA,进行RTPCR扩增并作琼脂糖凝胶电泳分析。1.5Muc1mRNA和CD44mRNA表达半定量实验将观察组36例肺癌组织匀浆,取细胞,调整为数量级107的细胞悬液,每份样品连续稀释为以下各数量级的细胞悬液:105、104、103、102。分别提取RNA,进行RTPCR扩增并作琼脂糖凝胶电泳分析。1.6总ＲＮＡ的提

7、取按Chomczynski一步法提取每例肺癌冰冻组织的总RNA，紫外分光光度计测量，判定所提取RNA的纯度，要求光密度值A260/A280＞1.7。将RNA溶液置-80℃冰箱保存。取2μlRNA溶液于2%琼脂糖凝胶进行电泳。阴性对照肺组织ＲＮＡ的提取步骤同上述冰冻组织RNA的提取。111.7引物Muc1mRNA和CD44mRNA引物由北京奥科生物技术有限责任公司合成。根据Noguchi的基因序列设计Muc1引物序列:正义5′CGTCGTGGACATTGATGGTAC3′，反义5′GGTACCTCCTCTCACCTC

8、CTCCAA3′，扩增片段为524bp。根据choi的基因序列设计CD44引物序列：正义5′ACAACTGGTGATGGAGACTCATCC3′，反义5′CAGAGTGGCTTATCATCTTGG3′，扩增片段为546bp。内参βactin引物序列为：正义5′TGGAATCC