99mtc示踪法初步研究注射ngf家兔药代动力学

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1、99mTc示踪法初步研究注射NGF家兔药代动力学作者：付昌文，吕天润，曹小建，刘军【摘要】目的使用99mTc示踪初步研究注射用NGF在家兔体内药代动力学。方法将NGF用99mTc标记，利用同位素示踪法和TCA沉淀法测得NGF含量与放射性计数的线性关系，并由静脉注射至家兔体内，通过上述检测方法得到不同时段血浆中微量NGF浓度，使用3P87软件分析药代动力学参数并初步分析组织分布。结果NGF静脉注射后的家兔体内代谢符合二隔室分布模型；按剂量40μg/kg静注后，测得T1/2α=0.077h、T1/2β=0.88

2、h、AUC=98.6514ng·h·ml－１。结论99mTc具有较好的示踪效果，适用于体内药代动力学研究。【关键词】99mTc-NGF；药代动力学；TCA沉淀法【Abstract】ObjectiveTostudythepharmacokiicsofNGFinrabbitbyisotopictracing.MethodsNGFTc，anditsγ-raycountsethod.Fromcpmofγ-rayandNGFcontentofsamples，thestandardcurveTc-NGFvenaauri

3、s.Samplesofrabbitbloode(0.00833，0.0166，0.05，0.0833，0.166，0.25，0.5，1，1.5，2，2.5，3，3.5，4h).Thetechniquesaboveacokiicparameterbysoftetabolisminvivoconformsthedouble-partmentsmodel.ontalcini于1986年获得诺贝尔医学奖［5］。有关NGF的血药浓度检测已有很多报道，但都比较复杂。本文将NGF用99mTc标记，利用同位素示踪法和TCA

4、沉淀法测得NGF含量，从而初步研究NGF脂质体在家兔体内药代动力学，以期为其他相关试验及今后的临床应用提供必要的参考资料。1材料与方法1.1仪器与试剂1.1.1仪器　　GC-911γ射线计数仪（中国科技大学仪器厂）；Ultrospec2000紫外分光光度仪(Pharmacia公司)；DFM-96多排放射免疫计数仪（众成电机技术公司）；FJ-391A1型活度仪（北京放射性仪表厂）；3P97软件(江苏省人民医院药剂科合作提供)；FA1004电子天平（上海精科天平）。1.1.2试剂　　小鼠颌下腺2.5SNGF（南

5、京军事医学研究所提纯，纯度>98%，文章另发）；99mTcO4(北京原子高科核技术应用股份有限公司)；亚锡（上海化学试剂三厂）；Kieselgel60F254硅胶板（德国EMscience）；柠檬酸缓冲液（南京森科医药公司）；三氯乙酸（南京生兴生物技术公司分装）；SephadexG-25(南京森科医药公司提供)。1.3实验动物实验用新西兰兔(雌雄各半、2.5kg，南京爱立默动物实验有限公司)。1.4方法1.4.1同位素示踪法与TCA沉淀法检测血浆中微量NGF用放射性元素99mTc标记NGF，对99mT

6、c-NGF用TCA沉淀［6］，然后对沉淀物进行γ计数仪计数，数值与NGF的含量存在线性关系，从而测定在血浆中微量NGF的浓度。1.4.1.1标准曲线的制备99mTc－NGF的制备：配制0.5％亚锡（Sn2＋）－柠檬酸缓冲液（cit）。取NGF20ml（含20mgNGF）、cit溶液100ml及配制的0.5％Sn2＋-cit溶液20ml，将其置于小瓶中，充入氮气3～5min，即制备完药箱置于4℃冰箱待标记时取出。加10mgVitC于cit溶液中，制备成10mg/mlVitC溶液；取出制备的药箱，在其小瓶中加0

7、.3ml高锝酸（99mTcO4）(具体放射量根据需要)，然后加入配制的10mg/mlVitC溶液0.1ml，混匀。即制备完99mTc－NGF。样品经SephadexG-25凝胶柱分离纯化，收集各组分，测量每管的γ计数，合并各峰收集组分并取出60μl，加考马斯亮蓝R-250染色，用紫外分光光度仪测定595nm处的吸光度，计算NGF的化学量。以收集99mTc-NGF峰的总放射性除以上样层析时的总放射性，即得99mTc-NGF的标记率。99mTc-NGF峰的总放射性除以该峰的总蛋白质量，即得比活度。纸层析法测定9

8、9mTc-NGF的放化纯度。配制10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、500ng/ml及1000ng/ml99mTc-NGF溶液各1份，各吸取20ml于试管中，加150μl生理盐水及30μl兔血清，加20％三氯乙酸200μl，5000rpm离心3min。去上清，测定各试管中沉淀物放射性计数，绘制标准曲线，求回归方程及回归系数。1.4.1.2测定方法的确证通过检测回收率及重复性试验研究证明该方法的可行性