醋酸棉酚对白血病hl论文

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1、醋酸棉酚对白血病HL论文【关键词】细胞凋亡EffectsofgossypolaceticacidonapoptosisanddifferentiationinleukemiaHL60cells【Abstract】AIM:Toinvestigatetheeffectsofgossypolaceticacid(GAA)onapoptosisanddifferentiationinclassichumanactuepromylocyticleukemiacelllineHL60andstudythepossibilityto

2、treatleukemiaeansofMTTassay.Apoptosisissionelectronmicroscopy,cellcycle,andDNAgelelectrophoresis,etc.ThedifferentiationofHL60cellsintomorematuregranulocytes(NBT)reductiontest.RESULTS:Morethan6μmol/LGAAcouldsuppresstheproliferationandinducetheapoptosisinHL60cells

3、inadosedependentmanner.NBTreductiontestdemonstratedthatHL60cellscouldalsobeinducedtodifferentiateintomorematuregranulocytesbylool/L,P0.05).CONCLUSION:GAAcouldselectivelyinducetheapoptosisofleukemiaHL60cellsinasmallerdosethanthatforhumanperipheralbloodmononuclear

4、cells,aybeanidealdrugforleukemiatherapy.【Keyol/L时可显著抑制HL60细胞的增殖，促进其凋亡，并表现出剂量效应；在诱导分化浓度下（1,4μmol/L），GAA可促进HL60细胞向成熟粒细胞分化(P0.05).结论：GAA对白血病细胞HL60的选择性促凋亡作用表明其可能是一种理想的高效低毒抗白血病药物.【关键词】棉酚；HL60细胞；细胞分裂；细胞凋亡；细胞分化0引言白血病发病率有显著升高的趋势［1］.近年来，多酚类药物的抗肿瘤作用日益受到重视［2］.作为多酚类药物的一分子，棉

5、酚天然存在于锦葵科某些植物的根、茎、种子中，其化学结构为2,2′联二萘8,8′二羧基醛1,1′,6,6′,.freela公司.电子显微镜（日本JEOL公司）；酶联免疫检测仪（美国BioRad公司）；流式细胞仪（美国BeckmanCoulter公司）.1.2方法1.2.1试剂准备用二甲基亚砜（DMSO）溶解GAA，浓度为12.5mmol/L，过滤除菌，分装，-20℃保存备用.RPMI1640按说明配制.FBS于56℃30min灭活，分装，-20℃冻存备用.MTT用0.01mmol/LPBS配制成浓度5g/L溶液，NBT用

6、9g/L生理盐水配成为2g/L溶液，分别过滤除菌，避光4℃保存备用.1.2.2细胞培养HL60细胞以1×108/L密度接种于含100mL/LFBS的RPMI1640培养基，置37℃,50mL/LCO2，饱和湿度的孵箱培养，每3～4d传代1次.将正常献血员分离的白细胞层用比重为1.077的淋巴细胞分离液分离，收集PBMNCs，经RPMI1640培养液洗涤，调整到所需细胞浓度培养［5］.1.2.3不同浓度GAA抑制HL60细胞增殖的作用GAA浓度从100μmol/L开始.以含同样梯度浓度DMSO的PRMI1640培养基为平

7、行孔.将HL60细胞以4×104/孔接种于96孔培养板中，每孔体积100μL.培养24h后按倍比稀释浓度梯度加入GAA，继续培养.每孔加入5g/LMTT20μL，继续培养4h，终止培养，离心吸去培养液，每孔加入150μLDMSO震荡10min，使结晶物充分溶解.用酶联免疫检测仪检测A490nm.以浓度为横轴，A值为纵轴绘制细胞生长曲线并计算半数抑制浓度值（IC50）［6］.检测GAA对PBMNCs的作用方法同上，接种密度为1.5×105/孔.1.2.4超微结构观察将终浓度为20μmol/L的GAA作用于对数生长期的HL

8、60细胞，24h后收获细胞，PBS洗涤2次，转移至Eppendorf管，1500r/min离心15min.40mL/L戊二醛固定，电子显微镜观察.1.2.5流式细胞仪检测细胞周期将终浓度为20μmol/L的GAA作用于对数生长期的HL60细胞，16h后收获细胞，PBS洗涤2次，700mL/L冷乙醇固定.流式细胞仪检测细胞周期.1.