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1、口腔细菌生物膜形成方法、特性及应用-->[摘 要]代写口腔医学论文许多研究证实生物膜中的细菌对抗菌剂的敏感性比其处于浮游状态时要低得多,而口腔细菌却常以生物膜方式致病,对许多抗菌剂具有很强的抵抗力,这就造成实验室的药敏结果用于临床效果不佳。因此详细了解处于生物膜状态的口腔细菌对抗菌剂的敏感性,对于临床上治疗和预防许多口腔疾病具有重要意义。[关键词]口腔细菌;生物膜;抗菌剂;敏感性 口腔两大常见疾病—龋病和牙周病均和牙菌斑有密切的关系。牙菌斑是一种典型的生物膜,控制牙菌斑的一个主要手段是使用抗菌剂。但是
2、我们有时会发现在临床治疗过程中使用抗菌剂并没有达到预期目的,研究表明,其中一个重要的原因就是我们在实验室测定细菌对抗菌剂敏感性时,用的是浮游状态的细菌,而不是生物膜。现在已有许多研究证实生物膜中的细菌对抗菌剂的敏感性比其处于浮游状态时要低得多,而口腔细菌却常以生物膜方式致病,对许多抗菌剂具有很强的抵抗力,这就造成实验室的药敏结果用于临床效果不佳。因此详细了解处于生物膜状态的口腔细菌对抗菌剂的敏感性,对于临床上治疗和预防许多口腔疾病具有重要意义。虽然目前生物膜的研究还受许多条件如生物膜形成条件的控制、检测
3、手段局限等因素限制,难度较大,但还是有许多相关研究陆续发表,本文就近年来口腔细菌生物膜对抗菌剂敏感性研究进展作一简要综述。1 口腔细菌生物膜形成方法口腔细菌生物膜的研究模型报道虽然很多,但归纳起来不外乎两大方面,一种是在体外形成生物膜,方法多样,较易进行,但和口腔内的实际情况有一定差别,目前口腔细菌生物膜对抗菌剂的敏感性较集中于体外研究;另一种则是在人口腔内形成生物膜,这种方法影响因素多,不易控制,但较接近口腔内的实际情况。因此本文按研究报道中生物膜形成方法分为体外形成生物膜和人口腔内形成生物膜两大类,
4、并分别归纳叙述口腔细菌生物膜对抗菌剂敏感性。1.1 体外形成的口腔细菌生物膜IC)的160倍。此研究结果显示生物膜中的Pg可能对甲硝唑全身用药所能达到的药物浓度仍具有耐受力[1]。用体外形成的伴放线放线杆菌(kouqiang/actinobacillusactinomycetemitans,Aa)生物膜比较几种漱口水的抗菌活性。其中所有3种漱口水对浮游状态的Aa杀灭均达到99.99%。而对生物膜中的Aa,只有一种含矿物油的漱口水LA,细菌减少达98.20%,具有显著统计学意义,而另两种漱口水,一种含有氟
5、化钠和氟化亚锡,另一种则含有玉洁纯,均无统计学意义[2]。粪肠球菌(enterococcusfaecalis)在难治性根尖周炎中常能检测到,用硝酸纤维膜在体外形成生物膜,分别测试对不同抗菌剂的敏感性,结果发现只有洗必泰对形成1d和3d的生物膜中的粪肠球菌数减少最多。同时指出形成1d的生物膜用于抗菌活性试验较有效;而形成3d的生物膜因脱落的细胞较多,虽不太适宜用于药敏试验,但因为形成3d的生物膜更成熟,所以更难以去除。建议临床上用洗必泰治疗难治性根尖周炎可能会有帮助[3]。在体外形成生物膜方法中,有一种称
6、作生物膜厚度恒定发酵装置(constantdepthfilmfermentor,CDFF)的方法用得较多。IC不能作为抗菌剂对血链球菌生物膜有效作用的一种可靠预估数据[4]。对于由多种口腔细菌一起形成的生物膜对抗菌剂的敏感性研究也有报道。Kinniment等用CDFF方法形成含9种口腔细菌的生物膜,分别和浓度为0.125mL/L和1.25mL/L的洗必泰作用,给药模式为每间隔12h药物作用一次,每次持续10min,共作用8次,最后计算其活菌数。结果显示0.125mL/L洗必泰对生物膜中细菌几乎没有什么影
7、响,而1.25mL/L洗必泰则对生物膜中各种细菌具有不同的抑制作用[5]。而Pratten等用CDFF方法形成含6种口腔细菌的生物膜,用2mL/L洗必泰分别作用1,5,60min,用扫描电镜观察。结果发现用2mL/L洗必泰作用1,5min时对生物膜中的细菌几乎没有影响,而作用60min时则有显著杀菌作用[6]。1.2 人口腔内形成的生物膜Netuschil等用自愿者牙面上自然形成3d的牙菌斑生物膜,用1mL/L洗必泰漱口后,从牙面上刮取牙菌斑,用fluoresceindiacetate(FDA)和eth
8、idiumbromide(EB)进行染色,在荧光显微镜下观察死菌或活菌数。结果发现用洗必泰作用后1h的生物膜中活菌百分比降至19%到34%,但到6h和8h后,活菌百分比又恢复到初始水平。Zaura-Arite等将牙本质块戴在自愿者牙面上形成牙菌斑生物膜,分别在6,24,48h后取下,用2mL/L洗必泰作用1min,然后进行荧光染色,最后用激光共聚焦扫描显微镜(confocalscanninglasermicroscopy,CSLM)进行观察
