小鼠结肠癌ct26细胞parp抑制后肝转移变化的影响论文

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1、小鼠结肠癌CT26细胞PARP抑制后肝转移变化的影响论文【摘要】目的:探讨小鼠大肠癌CT26细胞聚腺苷二磷酸核糖聚合酶〔Poly(ADPribose)polymerase,PARP〕抑制后肝转移变化及其可能的机制.方法：采用小鼠结肠癌CT26细胞肝转移模型，5氨基异喹啉酮(5AIQ)为PARP抑制剂.实验组分为两组，分别腹腔注射5AIQ3mg/（kg·d）和5AIQ10mg/（kg·d），对照组给予相应体积双蒸水.14d后，观察各组小鼠脾脏原发肿瘤和肝脏转移肿瘤体积、数目的变化.MP2）和基质金属蛋白酶9（MMP9）蛋白在各组脾脏原发瘤组织中的表达.

2、结果：5AIQ3mg/（kg·d）浓度组和5AIQ10mg/（kg·d）浓度组脾脏肿瘤体积分别为（0.92±0.23）cm3和（0.88±0.43）cm3，与对照组（2.64±0.72）cm3相比较明显缩小.freelg/（kg·d）浓度组和5AIQ10mg/（kg·d）浓度组分别为(4.20±2.95)个，(5.40±3.31)个，两组间差异无统计学意义（P0.05），但与对照组(47.18±9.81)个相比较，差异均具有统计学意义（P0.05）.5AIQ3mg/（kg·d）浓度组小鼠脾脏原发瘤组织PARP，NFκB，MMP2和MMP9表达分别为（1

3、.00±0.09），（0.55±0.03），（0.58±0.05），（0.48±0.06），与对照组（1.56±0.14），（0.84±0.07），（0.91±0.08）和（0.74±0.10）相比较明显降低，差异具统计学意义（P0.05）.结论：小鼠结肠癌CT26细胞PARP抑制可抑制肿瘤的生长及肝转移，可能与PARP通过NFκB调节MMP2，MMP9蛋白表达有关.【关键词】聚腺苷二磷酸核糖聚合酶;NFκB；肝转移;结肠肿瘤0引言聚腺苷二磷酸核糖聚合酶〔Poly(ADPribose)polymerase,PARP〕是一种普遍存在于真核细胞内的单体核酶，研

4、究［1-3］发现其与多种疾病有关.抑制PARP可抑制炎症过程中内皮细胞NFκB依赖性基因（如Pselectin,ICAM1）的表达，并可抑制新生血管的形成［4］.但抑制PARP能否达到抑制大肠癌细胞的生长和转移的相关研究还少见报道.本研究应用小鼠结肠癌CT26细胞肝转移模型，观察体内PARP抑制剂5氨基异喹啉酮(5aminoisoquinolinone，5AIQ)腹腔注射给药抑制小鼠大肠癌CT26细胞PARP后，脾脏原发瘤生长和肝转移变化，检测PARP，NFκB，MMP2和MMP9在小鼠脾脏原发瘤组织中的表达，初步探讨小鼠体内PARP抑制与肿瘤生长

5、及转移的关系及其可能的机制.1材料和方法1．1材料雌性BALB/c小鼠18只，6～8g/（kg·d）和5AIQ10mg/（kg·d）；对照组小鼠腹腔注射相应体积的双蒸水.14d后处死各组小鼠，观察其脾脏肿瘤体积大小、数目和肝脏肿瘤转移结节数目、大小、有无融合等.光镜下观察脾脏肿瘤和肝转移灶组织学变化.取脾脏肿瘤组织，液氮保存备用.参照文献［6］的方法，按下列公式计算脾脏肿瘤体积（V）：V=0.5×a×b2.其中a为肿瘤长径，b为肿瘤短径，若有多个肿瘤则计算体积的总和.1.2.2MP2，MMP9蛋白表达将保存于液氮中5AIQ3mg/（kg·d）组及对照组脾脏肿

6、瘤组织，裂解、匀浆.提取总蛋白,并用BCA法测定蛋白浓度.聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳，将蛋白质转移至PVDF膜上，50g/L脱脂奶粉封闭，加入抗MMP2，MMP9抗体一抗，4℃过夜，洗涤后，分别加入相应的辣根过氧化物酶标记的IgG二抗，其余步骤同1.2.2.1.统计学处理：实验数据以x±s表示，采用SAS8.0统计软件，进行Krukalenyi法分析，P0.05为差异有统计学意义.2结果2.1CT26细胞脾原发瘤和肝转移灶组织学观察光镜下观察，脾脏见明显的低分化腺癌组织，肿瘤细胞异型性明显，形成癌巢，肝脏内亦可见转移性低分化腺癌,结构与脾脏内肿瘤形态结构相似（图1

7、）.其他器官未见肿瘤转移结节形成.A：脾脏低分化腺癌；B:肝脏低分化腺癌.图1小鼠脾原发瘤和肝转移灶组织学变化HE×4002.2PARP抑制剂5AIQ对小鼠结肠癌CT26细胞肝脏转移的影响5AIQ3mg/（kg·d）浓度组和10mg/（kg·d）浓度组，脾脏均可见肿瘤结节，多为1～3个，其脾脏肿瘤体积分别为（0.92±0.23）cm3和（0.88±0.43）cm3，与对照组（2.64±0.72）cm3相比较，差异具有统计学意义(P0.05)；但5AIQ不同剂量浓度组之间差异无统计学意义(P0.05).5AIQ3mg（kg·d）浓度组和10mg/（kg·d