复方五仁醇胶囊保肝作用的血清药理学研究

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1、复方五仁醇胶囊保肝作用的血清药理学研究作者：张兵，窦志华，罗琳，达坤林，尤蝠仪，曹卫菊【摘要】目的：建立复方五仁醇胶囊血清药理学研究方法。方法：建立CCl4诱导的原代培养大鼠肝细胞损伤模型，大鼠为含药血清供体，以含药血清对损伤肝细胞增殖（MTT法）及丙氨酸氨基转移酶（ALT）泄漏的影响两个指标，结合含药血清中五味子乙素的含量测定，分别采用单因素考察、多因素的正交试验，优选含药血清的制备方法，并确定体系中血清添加量。结果：每天以成人等效剂量10倍的甲醇提取物间隔8h分两次给正常大鼠灌胃给药，连续3天，末次

2、给药后2h采血制备含药血清比较合理，体系中加入10%该条件下制备的含药血清能明显提高损伤肝细胞的增殖能力、降低细胞ALT泄漏。结论：适宜条件下制备的复方五仁醇胶囊含药血清对肝细胞损伤具有明显的保护作用，血清药理学研究方法可以用于该制剂的药效评价。【关键词】复方五仁醇胶囊；保肝作用；含药血清；血清药理学[Abstract]Objective：ToestablishaserumpharmacologytestingmethodforpoundaryculturehepatocytecontainingCTT

3、),alanineaminotransferase(ALT)incellculturemediumandthecontentofschisandrininserumasindices,single-factorinvestigationandmultiple-factororthogonalexperimentorplasma,andserumcontainingdruginculturesystemofdifferentconcentrationonpharmacologicaleffectandto

4、screenofthepreparativemethodofserumcontainingdruganditssuitableconcentrationinculturesystem.Results：Normalratsasthedonatorofserum,usingmethanolicextractofCRESCO公司分装）；胶原酶IV（美国Sigma公司分装）；胰蛋白酶（美国Sigma公司分装）；DMEM培养基（美国GIBCO公司）；新西兰新生小牛血清（美国HyClone公司）；四氯化碳（宜兴市第

5、二化学试剂厂）；溴化3-(4,5-二甲基噻唑)-2,5-二苯基四氮唑蓝（MTT，AMRESCO公司）；五味子乙素（中药固体制剂制造技术国家工程研究中心）；复方五仁醇胶囊（本院自制）。1.1.3仪器HERAcellCO2培养箱（德国GmbH公司）；BIO-TEK340酶标仪（美国Sigma公司）；日立7170全自动生化分析仪（日本日立公司）；Agilent1100Series高效液相色谱仪（美国Agilent公司）。1.2方法1.2.1大鼠灌胃用药物的处理取复方五仁醇胶囊内容物，加0.5%CMC-Na制成

6、混悬液。另取复方五仁醇胶囊内容物，甲醇回流提取，加0.5%CMC-Na制成混悬液。1.2.2肝细胞的分离与培养按1.2.6统计学方法使用Stata7.0统计软件包进行数据处理。数据以x±s表示，用方差分析处理数据。2结果2.1含药血清制备方法考察Ⅰ：给药形式及剂量考察与正常对照组相比，模型对照组MTT值显著下降（P<0.01）、ALT显著升高（P<0.01），说明造模获得成功；与模型对照组比较，除提取物小剂量组MTT值无显著差异外（P>0.05），其余各试验组MTT值均明显升高（P&l

7、t;0.01或P<0.05），ALT明显下降（P<0.01或P<0.05）；与提取物中剂量组比较，等剂量灌胃制备的制剂原形组MTT值及ALT差异均无统计学意义（P>0.05）。结果提示，制剂的甲醇提取物与制剂原形具有等效性，且3个剂量组不存在明显的量效关系。故确定以成人临床等效剂量10倍的甲醇提取物给大鼠灌胃制备含药血清。见表2。2.2含药血清制备方法考察Ⅱ：其他条件的正交试验考察将各试验组3个指标的测定结果分别按百分制转换成积分（MTT、五味子乙素以最高为100，ALT以倒数计

8、算，最高为100），综合加权评分（MTT、ALT、五味子乙素分别占35%、35%和30%）后进行统计分析。结果见表3。方差分析结果显示，C因素（取血时间）对结果有极显著影响（P<0.01），B因素（给药间隔时间）有显著影响（P<0.05），且两者之间存在交互作用（B×C之P<0.05，交互作用分析显示最佳组合为B1C1），血浆的影响优于血清，但无统计学意义（P>0.05），而动物是否造模几乎没有影响（见表4）。因此，