复方五仁醇胶囊保肝作用的实验与临床研究

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1、复方五仁醇胶囊保肝作用的实验与临床研究作者：朱浩然窦志华罗琳张兵李民达坤林【摘要】目的考察复方五仁醇胶囊对损伤肝细胞的保护作用及对慢性肝炎的治疗效果。方法以SD大鼠为供体制备复方五仁醇胶囊含药血清，CCl4诱导大鼠原代培养肝细胞损伤模型，采用血清药理学方法考察含药血清对损伤肝细胞增值（MTT法）和培养上清液中丙氨酸氨基转移酶（ALT）的影响；将446例慢性乙型肝炎患者随机分成治疗组和对照组，以临床症状、体征、肝功能为主要指标，考察复方五仁醇胶囊的治疗效果。结果与模型组比较，含药血清组MTT值明显升高，上清液中ALT均显著

2、下降，体系中加入10%含药血清效果最佳；治疗组、对照组临床症状、体征及肝功能指标均明显得到改善，复方五仁醇胶囊的疗效优于阳性对照药护肝片。结论复方五仁醇胶囊对肝细胞损伤具有明显保护作用，对慢性肝炎有较好治疗作用。【关键词】复方五仁醇胶囊；保肝作用；血清药理学；临床观察　　Abstract：ObjectiveToinvestigatetheprotectiveeffectofthepoundTT)andalanineaminotransferase(ALT)concentrationincellculturemediumi

3、ned.446patientsentalgroup(treatedbyCTTincrementanddepressALTsignificantly,ptomandliverfunctionofpatientsinexperimentalandcontrolgroupsprovedaftertreatment,andthetherapeuticeffectofC21）；乙二醇双（2-氨基乙醚）四乙酸（EGTA，美国AMRESCO公司分装,批号0732）；胶原酶IV（美国Sigma公司分装,批号0406）；胰蛋白酶（美国Si

4、gma公司分装,批号030702）；DMEM培养基（美国GIBCO公司,批号1255136）；新西兰新生小牛血清（美国HyClone公司，批号DPEO166）；溴化3-（4,5-二甲基噻唑）-2,5-二苯基四氮唑蓝（MTT，AMRESCO公司,批号1324B37）；四氯化碳（宜兴市第二化学试剂厂，批号20010608）；复方五仁醇胶囊（本院自制，批号050505）；HERAcellCO2培养箱（德国GmbH公司）；BT-200B数显恒流泵（上海沪西分析仪器厂）；BIO-TEK340酶标仪（美国Sigma公司）；日立717

5、0全自动生化分析仪（日本日立公司）。　　1.1.2含药血清、空白血清的制备SD大鼠4只，禁食12h(自由饮水)，称重，每天按照4.50ml/kg（相当于成人临床等效剂量的10倍）分两次灌胃复方五仁醇胶囊甲醇提取物的0.5%CMC-Na混悬液，连续给药3d。末次给药后2h以3%戊巴比妥钠1.5ml/kg腹腔注射麻醉，颈总动脉取血，置冰箱4℃冷藏过夜，分离血清，即为含药血清。SD大鼠每天0.5%CMC-Na4.50ml/kg灌胃，同法制备空白血清。　　1.1.3肝细胞的分离与培养大鼠用3％戊巴比妥钠1.5ml/kg腹腔注射麻

6、醉，门静脉插管，以37℃无钙灌流液（组成：HBSS500ml，HEPES1.19g，EGTA0.095g，NaHCO30.175g，pH7.4）灌流约20min后，换用37℃的通氧胶原酶灌流液（组成：HBSS100ml，HEPES0.238g，CaCl20.07g，胶原酶IV0.075g，胰蛋白酶0.01g，NaHCO30.035g，pH7.4）继续灌流10min后取下肝脏，剪开肝包膜，将肝细胞悬液过滤清洗后悬浮于含10％新生小牛血清的DMEM培养基中，并用台盼蓝染色法检测细胞活力达90％，以1×105/cm2接种于96

7、孔及48孔板中，置CO2培养箱（5％CO2）37℃培养。　　1.1.4肝细胞的分组与处理培养24h后，吸弃上清液，随机分成6组（正常组、模型组及5%，10%，20%，40%含药血清组），每组设6个复孔。模型组和各含药血清组更换为加入CCl410mmol/L的DMEM培养液，正常组相应加入DMEM培养基，正常组和模型组加入终浓度为10％的空白血清，5%，10%，20%，40%含药血清组加入含药血清，使终浓度分别为5%，10%，20%和40%。作用24h后，收集48孔板中培养上清液检测ALT。96孔板中每孔加入5mg/ml的

8、MTT液20μl，继续孵育4h，每孔再加入DMSO200μl，振荡，使结晶物充分溶解，用酶标仪于检测波长570nm，参比波长655nm测定各孔吸光度（A）。　　1.1.5统计学处理数据以±s表示，使用ol/L。病例随机分成两组，其中治疗组264例，对照组182例。两组在年龄性别病情及病程方面具有可比性(P>0.