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1、银翘散标准汤剂比较研究论文.freeledicalinstitutiondecoctionanddecoctionbinedarchaicoderntechnology,selectthebestmethodandprovidetheimportanttheorybasisforstandardizationofdecoctiontechnicsofdiaphoreticrecipes.MethodsThemajorcontentsoftraditionalChinesemedicineinedbyHPLCandusedastheevaluatingindicatoraseth
2、odofarchaicdecoctiongotthehighestsyntheticscores,andthevalidatingexperimentalresultethodofarchaicdecoctioncouldbeusedasthereferencestandardforpreparationtechnologyofYinqiaoPoin和6min为优,实际煎煮过程中亦发现银翘散在煮沸3min后即香气大出。因此,把沸后3min作为银翘散古代方剂煎煮法的煎煮时限。本试验按处方比例称取药材,粉碎成最粗粉,置砂锅中,加10倍水,以大火烧开后保持沸腾3min,过滤,滤液备用
3、。2.1.2日本标准汤剂煎煮法在日本,称取相当于日剂量中药制剂的标准药材,粉碎,加20倍量水,煎煮30min以上,浓缩至原体积的一半,趁热过滤,即可制得标准煎剂3。本试验按处方比例称取药材,粉碎成最粗粉,置烧杯中,加20倍量水,煎煮,保持微沸30min以上,药液至原体积的一半,停止加热。过滤,滤液备用。2.1.3医疗机构煎煮法参考医院煎药操作规程4,按处方比例称取药材,置砂锅中,浸泡30min,煎煮2次,第1次加7倍量水,煎煮,保持微沸15min,第2次加3倍量水,煎煮,保持微沸10min,过滤,合并滤液备用。2.1.4古今结合煎煮方法按处方比例称取药材,置砂锅中,浸泡30mi
4、n,煎煮2次,分别加7、3倍量水,2次煎煮均保持微沸3min,过滤,合并滤液备用。2.2色谱条件2.2.1金银花色谱柱：依利特ODS柱(150mm×4.6mm,5μm)；流动相：乙腈-0.4%磷酸溶液(9∶91)；检测波长：327nm；柱温：25℃；流速：1mL/min；进样量：对照品10μL,样品5μL。色谱图见图1。注：A.对照品；B.样品(下同)图1绿原酸HPLC图谱2.2.2连翘色谱柱：依利特ODS柱(150mm×4.6mm,5μm)；流动相：乙腈-水(18∶82)；检测波长：277nm；柱温：25℃；流速：1mL/min；进样量：对照品、样品均为5μL。色谱图见图2。
5、图2连翘苷HPLC图谱2.2.3荆芥、薄荷色谱柱：依利特ODS柱(150mm×4.6mm,5μm)；流动相：乙腈-水(38∶62)；检测波长：256nm,柱温：25℃；流速：0.8mL/min；进样量：对照品5μL,样品20μL。色谱图见图3。图3胡薄荷酮HPLC图谱2.2.4牛蒡子色谱柱：依利特ODS柱(150mm×4.6mm,5μm)；流动相：甲醇-水(1∶1.1)；检测波长：280nm；柱温：30℃；流速：1mL/min；进样量：对照品5μL,样品10μL。色谱图见图4。图4牛蒡苷HPLC图谱2.3对照品溶液的制备精密称取绿原酸对照品6.78mg,加50%甲醇制成每1mL
6、含0.2712mg的溶液；精密称取连翘苷对照品4.89mg,加甲醇制成每1mL含0.1956mg的溶液；精密称取胡薄荷酮对照品2.53mg,加甲醇制成每1mL含0.1012mg的溶液；精密称取牛蒡苷对照品11.95g,加甲醇制成每1mL含0.478mg的溶液。上述各溶液分别作为绿原酸、连翘苷、胡薄荷酮、牛蒡苷对照品溶液。2.4样品溶液的制备精密吸取上述古代方剂煎煮法、日本标准汤剂煎煮法、医疗机构煎煮法、古今结合煎煮方法的各标准汤剂煎出液10mL,置25mL容量瓶中,绿原酸待测样品用50%甲醇定容至刻度,连翘苷、牛蒡苷、胡薄荷酮待测样品用甲醇定容至刻度,摇匀,用0.45μm微孔滤
7、膜过滤,取续滤液即得古代方剂煎煮法、日本标准汤剂煎煮法、医疗机构煎煮法、古今结合煎煮法样品溶液。2.5标准曲线及线性范围分别吸取上述4种对照品溶液,注入液相色谱仪中,按上述色谱条件测定,记录峰面积和进样浓度。以对照品峰面积为纵坐标、进样量(μg)为横坐标绘制标准曲线。绿原酸进样量在0.2712～4.068μg范围内与峰面积呈良好的线性关系,回归方程为：Y＝410.89X－2.84,r＝0.9999；连翘苷进样量在0.0978～2.934μg范围内与峰面积呈良好的线性关系,回归方程为：Y＝18
