高效液相色谱法测定诃子中鞣花酸的含量论文

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1、高效液相色谱法测定诃子中鞣花酸的含量论文贝玉祥，杨阳，郭英，李正全，高云涛【摘要】目的建立诃子提取物中鞣花酸含量的高效液相色谱(HPLC)测定方法。方法色谱条件Shim-packCLC-ODS色谱柱(150mm×6mm，5μm)，柱温30℃,用CH3OH-EtOAc-KH2PO4/H3PO4(0.05mol/L)(体积比30∶2∶68)作为流动相,检测波长为254nm。结果鞣花酸在0.268～5.36μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。平均加样回收率为98.42%,RSD为1.13%(n=5)。结论该方法快速、简便、准确，可用于诃子中鞣花酸的含量测定。【关键词】诃子

2、;鞣花酸;高效液相色谱Abstract：ObjectiveTodevelopanHPLCmethodforthedeterminationofellagicacidintheextractofTerminalia.MethodsHPLCseparation-packCLC-ODScolumm(150mm×6mm.freel)obilephaseconsistedofmethanolethylacetate,0.05mol/LKH2PO4-H3PO4(34∶2∶64)ataflol/min.Thedetection.ResultsThelinearrangelfore

3、llagicacid.Theaveragerecoveryethodisrapid,accurateandreproduciblefordeterminationofellagicacidintheextractofTerminalia.Keyinalia;Ellagicacid;HPLC诃子TerminaliachebulaRotz.又名诃黎、诃黎勒、随风子，为使君子科植物的果实1。诃子作为中药在中医临床上广泛使用，用于油脂抗氧化方面的研究在国内已见有专门报道2。诃子果实中含丰富的鞣质和多元酚类，约为30%～40%3已有文献报道，鞣质和多元酚类具有较好的抗氧化性4

4、。鞣花酸(2，3，7，8-tetrahydroxybenzopyrano5，4，3-cdebenzopyran-5，10-dione)是一种植物多酚类化合物5(如图1)，为诃子中主要的活性成分之一，广泛存在于各种自然的软果、坚果等植物果实中。它对化学物质诱导癌变及其他多种癌变有明显的抑制作用，它能与人体内有害自由基结合，具有强力祛癌变功效，可以抗衰老、增加机体免疫，还具有降压、镇静作用，对多种细菌、病毒有很好的抑制作用6。因此鞣花酸有“克癌之星”“致癌物清除剂”之美称。从机理上讲，鞣花酸是一种抗氧化剂7，它可作为保健食品添加剂，研究、开发本品具有较高的经济价值和广泛

5、的应用范围。本实验建立了HPLC法测定诃子中鞣花酸含量的方法，并对文献报道的多种色谱条件进行了比较8～10，表明本文方法精确可行。1仪器与试剂日本岛津SPD-10AT高效液相色谱仪;SPD-10Avp检测器;SIL-10AP自动进样器;超纯水器(arium611UF，Sartorius);超声波清洗器(AS3120A，天津瑞森特);电子天平(AdventurerTM，AR2140，上海奥豪斯公司);旋转蒸发仪(R-200，瑞士Buchi)。岛津UV2100型，甲醇为色谱纯;实验用水为超纯水，蒸馏水自制，其它试剂均为国产分析纯试剂。鞣花酸对照品(购自购自成都普瑞法科技

6、开发有限公司),纯度≥98%。诃子(产自云南临仓和缅甸)。图1鞣花酸的结构2方法2.1色谱条件色谱柱为岛津Shim-packCLC-ODS柱(150mm×6mm，5μm)，柱温30℃，用CH3OH-EtOAc-KH2PO4/H3PO4(0.05mol/L)(体积比34∶2∶64)作为流动相，检测波长为254nm。2.2对照品溶液的制备精密称取鞣花酸对照品6.7mg，加甲醇25ml制成每毫升含0.268mg的对照品溶液。2.3供试品溶液的制备精密称取诃子粉(均过60目筛)约1g，置于100ml具塞三角烧瓶中，加60%乙醇25ml，超声提取60min，过滤，用60%洗涤

7、滤渣，合并滤液和洗涤液，50℃旋转蒸干，加甲醇定容至10ml，以0.45μm微孔滤膜滤过，滤液作为样品供试液，进样10μl。2.4标准曲线制备精密吸取对照品溶液1.0，2.0，5.0，10.0，15.0，20.0μl进样，测定峰面积，并以色谱峰峰面积(A)对对照品的量(m)回归(包括原点)，得回归方程为A=7.5777E+06m+9.6700E+05(R=0.9999)。鞣花酸0.268～5.36μg范围内，线性关系良好。2.5精密度和样品重复性实验重复进对照品溶液10μl/次，测得鞣花酸峰面积相对标准偏差RSD=0.9%(n=6);对同一样品按拟定的方法作多次