hplcfld法测定丹参素在家兔组织中的分布论文

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1、HPLCFLD法测定丹参素在家兔组织中的分布论文胡珊珊刘洁刘少静房敏峰王世祥孙文基郑晓晖【摘要】目的：建立高效液相色谱荧光检测（HPLCFLD）分析方法，测定丹参素在家兔心、肝、脾、肺、肾、脑各组织中的含量.方法：家兔经丹参药材水提液灌胃后，其重要脏器的匀浆液以100mL/L高氯酸沉淀，上清液乙酸乙酯萃取.以4羟基苯甲酸为内标，测定丹参中丹参素在组织中的含量.结果：HPLCFLD法的检测限为0.01μg/mL，线性范围为0.05～200.00μg/mL；丹参中丹参素在家兔心、肝、脾、肺、肾、脑组织中的含量顺序为c肾c肝c心c肺c脑c脾.结论：建立的HPLCFLD检测法具有特异性

2、强，灵敏度高和定量准确等特点，可为其他样品中丹参素的测定提供参考.【关键词】丹参素；高效液相色谱荧光检测法；组织分布【Abstract】AIM:Todetectionofdanshensulevelsinrabbittissues,oneofthebioactivepoundsinSalviamiltiorrhizaebyhighperformanceliquidchromatographyfluorescencedetectionmethod(HPLCFLD).METHODS:TissuesamplesofrabbitsL/L)acidafteroraladministratio

3、nofSalviamiltiorrhizae.TheresultingsupernatantineditofthemethodL,andthelinearrangeL.ThecharacteristicprofileofDanshensuindifferenttissuesethodisspecific,sensitiveandaccurate,soitcouldbeusedforanalysisofDanshensuinotherbiologicalsamples.【Keyanceliquidchromatographyuleravioletdetection,HPLCUV）.然而，

4、HPLCUV法与荧光检测法相比较，存在灵敏度低和特异性较差等缺点，虽然质谱法可用于生物样品中丹参素的分析，但由于该仪器设备比较昂贵而不易被利用和普及.本研究建立高效液相色谱荧光检测（highperformanceliquidchromatographyfluorescencedetection,HPLCFLD）法，用HPLCUV和HPLCFLD两种方法测定家兔灌服丹参水提物后，其主要脏器组织中丹参素的含量，为丹参药材中丹参素在其他生物体液中的含量测定提供方法.1材料和方法1.1材料健康家兔12只，雌雄兼用，体质量1.8～2.5kg（动物合格证号：医动字08018，西安交通大学

5、医学院实验动物中心）；1100型高效液相色谱仪（配有荧光检测器，紫外全波长扫描二极管阵列检测器，美国安捷伦公司）；BP221s型电子天平（德国赛多利斯公司）；TGL16G型离心机（上海安亭科学仪器厂）；丹参药材（经陕西省药品检定所鉴定，西安药材公司）.对照品：丹参素(批号110855200504，中国药品生物制品检定所)；4羟基苯甲酸（化学纯，批号920728，北京化工厂）.甲醇(色谱纯，美国费希尔公司)；高氯酸、乙酸乙酯、甲酸（均为分析纯，天津化学试剂二厂）.1.2方法1.2.1丹参药材供试品溶液的制备取丹参药材粉碎干燥至恒重.精密称取丹参150g，以8倍量水浸泡30min，加热回

6、流提取2次，每次1.5h，合并提取液，抽滤，滤液减压浓缩至75mL，4℃冷藏备用.1.2.2对照品溶液的制备精密称取丹参素对照品5.0mg，用甲醇定容于10mL容量瓶中，制备成0.50mg/mL的丹参素对照品溶液.同法制备0.91mg/mL的4羟基苯甲酸供试品溶液（内标溶液）.1.2.3含药组织供试品溶液的制备随机抽取健康家兔6只，按10g/kg丹参生药量灌胃，于给药后50min处死，迅速摘取心、肝、脾、肺、肾、脑，液氮冷冻.解冻后，分别精密称取脾0.8g，心2.0g，肝、肺、肾和脑均为4.0g，于脾中加入1.2mL生理盐水，于心中加入3.0mL生理盐水，于肝、肺、肾和脑中各加入6.0m

7、L生理盐水，冰浴下匀浆.匀浆液于2146.56g离心10min，取上清液，以0.5mL匀浆液加50.0μL浓度为100mL/L高氯酸沉淀蛋白，于2146.56g离心10min，取上清液，上清液用2倍量（V∶V）乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯层，氮气吹干，残渣用0.5mL流动相溶解，0.45μm微孔有机系膜滤过，4℃冷藏备用.1.2.4色谱条件色谱柱：安捷伦ZORBAXSBC18液相色谱柱(150mm×4.6mm，5μm