hplc法测定丹参脂溶性成分的含量论文

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1、HPLC法测定丹参脂溶性成分的含量论文【摘要】运用HPLC技术分析丹参脂溶性成分组成，并建立了四种丹参脂溶性成分的HPLC含量测定方法。采用AgilentZorbaxSB-C18色谱柱(4.6×250mm,5μm)，以乙腈-水-乙酸为流动相进行梯度洗脱，流速为1.0mLmin-1，检测波长为280nm。通过与对照品比较，建立HPLC分析方法同时测定隐丹参酮、二氢丹参酮、丹参酮I和丹参酮IIA四种脂溶性成分的含量，该方法的重复性RSD小于2.0%，平均回收率为98.3～101.6%。本文所建立的方法操作简便快速.freelethodforsimultaneousdeterminationofma

2、intanshinonesofSalviamiltiorrhiza．Fourtanshinonesn(4．6mm×250mm，5μm)．Agredientelutionedbyusingmethanol-obilephase．ThefloLmin-1．TheRSDoftherepeatabilityethodisrapid，easilyoperated，reliableandcouldbeusedforthequalitycontrolofSalviamiltiorrhiza．【Keystation色谱工作站)。1.2试药丹参酮I、丹参酮IIA对照品购自中国生物药品检验所，二氢丹参酮、隐丹参酮

3、对照品购自长沙上河生物科技有限公司。甲醇、乙腈为色谱纯(美国Merck公司)，丹参药材购自安徽亳州中药材市场。1.3试液制备1.3.1对照品贮备液:取对照品二氢丹参酮、隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮IIA适量，精密称定，加入甲醇制成对照品混合液，即得。1.3.2供试品溶液的制备:取丹参5g，加入甲醇50mL，超声处理30min，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，微孔滤膜滤过即得。1.4色谱分析条件色谱柱:AgilentZorbaxSB-C18色谱柱(4.6×250mm,5μm，Agilent公司)，流动相A为0.1%乙酸溶液，流动相B为乙腈，梯度洗脱：0-5min时65%B，10～30min时70

4、%B，40min时95%B，流速1.0mL/min，柱温35℃，检测波长280nm，进样量20μL。2实验结果与讨论2.1线性关系考察逐级稀释对照品储备液1-100倍得到8个不同浓度的对照品溶液，按1.4项下的色谱条件进行分析，以峰面积为纵坐标，对照品溶液浓度为横坐标，绘制工作曲线，计算各对照品的回归方程，见表1。表1四种丹参脂溶性成分线性回归方程2.2精密度试验按1.3.2项下方法制备供试品溶液，按1.4项下色谱条件连续进样6次，测定峰面积，计算精密度。二氢丹参酮RSD0.88%，隐丹参酮RSD0.42%，丹参酮I的RSD0.26%，丹参酮IIA的RSD0.28%。2.3重复性试验按1.3.

5、2项下方法制备同一批供试品溶液5份，计算每克丹参药材中各成分含量。二氢丹参酮含量0.74mgg-1，RSD1.86%;隐丹参酮含量1.34mgg-1，RSD1.32%;丹参酮I含量3.23mgg-1，RSD1.03%;丹参酮IIA含量1.75mgg-1，RSD0.89%。2.4稳定性试验按1.3.2项下方法制备供试品溶液，按1.4项下色谱条件连续7天内进样测定，每天连续进样3次，测定峰面积，计算二氢丹参酮RSD1.42%，隐丹参酮RSD0.95%，丹参酮I的RSD0.93%，丹参酮IIA的RSD0.77%，表明样品溶液至少在一周内稳定。2.5加样回收试验配制二氢丹参酮0.253mgmL-1、隐

6、丹参酮0.469mgmL-1、丹参酮I1.012mgmL-1、丹参酮IIA0.778mgmL-1的对照品溶液10mL。分别精确量取0.8，1.0，1.2mL的对照品溶液各3份于锥形瓶中，挥干，每份加入精密量取丹参药材粉末约2g，混合均匀，精密加入25mL甲醇，按1.3.2项下方法制得供试品。按1.4项下色谱条件进行HPLC分析，每个样品进样3次，计算平均加样回收率。各物质平均加样回收率分布在98.3%-101.6%之间，符合检测要求。2.6样品测定结果取丹参药材，粉碎过筛，按1.3.2项下方法分别制备供试品溶液各5批，按1.4项色谱条件分析，每个样品进样3次，计算1g丹参药材中二氢丹参酮、隐丹

7、参酮、丹参酮I和丹参酮IIA的含量分别为0.71mgg-1、1.32mgg-1、3.34mgg-1、1.70mgg-1。3讨论与结论本研究对丹参脂溶性成分的提取方法做了比较分析，分别采用了回流法、渗漉法、冷浸法、超声法、超临界萃取法，结果显示超声法操作简便、提取效率高，因此最终采用该法作为脂溶性成分的提取方法。本研究采用HPLC技术对丹参药材中脂溶性成分进行了鉴定和含量测定分析，研究结果表明，实验