春柴胡中槲皮素30葡萄糖醛酸苷的单体制备与含量测定研究论文

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1、春柴胡中槲皮素30葡萄糖醛酸苷的单体制备与含量测定研究论文.freelasilC18（4.6mm×250mm,5μm)，流动相甲醇-0.5%醋酸（43∶57，V/V)，检测波长365nm。结果从春柴胡正丁醇萃取部位分离得到一化合物，鉴定为槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷；槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷的线性范围为4.375～140μg·ml-1，r=0.9998；平均回收率为98.43%，RSD为2.26%(n=6)。结论槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷化合物系首次从该柴胡属植物中分离得到，建立的春柴胡中槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷

2、高效液相色谱含量测定方法，简便、准确可靠，可用于春柴胡药材的质量控制。【关键词】春柴胡；化学成分；槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷；高效液相柴胡为常用的发散风热药，具有和解表里，疏肝解郁，升阳的功能，在我国已有二千多年的应用历史。《中国药典》2005年版收载的柴胡为伞形科植物柴胡BupleurumchinenseDC.或狭叶柴胡BupleurumscorzonerifoliumETTLERAE240分析天平（上海梅特勒-托利多仪器有限公司）；台式冷冻高速离心机TGLL-18K（江苏太仓华美生化仪器有限公司）BRUKER400型

3、核磁共振仪。甲醇为色谱纯（江苏汉邦科技有限公司），水为娃哈哈纯净水，其余试剂均为分析纯。槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷对照品(自行从春柴胡药材中分离、精制而得，经光谱鉴定结构，并利用面积归一化法进行纯度检查，纯度为99.5%)。1.2药材春柴胡药材采集于镇江句容地区，（见表1）。均由镇江市药品检验所张林松主任中药师鉴定，为春季采收的狭叶柴胡BupleurumscorzonerifoliumeOH）nm:355，258，210；ESI-MSm/z：479［M+H］+，501［M+Na］+，303［M+H-176］+，经酸水解检

4、测到槲皮素苷元，1HNMR(CD3OD，400MHz)δ：δ：8.02(1H,d,J=2.2Hz,H-2')，7.50(1H，dd，J=8.9and2.2Hz,6'-H)，6.86(1H，d，J=9.04Hz，5'-H)，6.35(1H，d，J=1.48Hz，8-H)，6.17(1H，d，J=1.48Hz，6-H)，5.32(1H，d，J=7.56Hz，1″-H)，3.64(1H，d，J=9.52Hz，5″-H)，3.48-3.60(3H，m，2″，3″，4″-H)；其理化常数和光谱学数据与文献［10］报道一致，故鉴定化合

5、物Ⅰ为槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷(quercetin-3-O-glucuronide)。2.2春柴胡中槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷的含量测定2.2.1色谱条件色谱柱为KromasilC18(4.6mm×250mm，5μm)，检测波长365nm，柱温30℃，流速0.7ml·min-1，流动相为甲醇-0.5%醋酸（43∶57，V/V)，进样体积为20μl，记录40min。在上述色谱条件下，对照品和样品的色谱图见图1。2.2.2供试品溶液的制备取春柴胡药材粉末（过40目筛）1g，精密称量，置100ml锥形瓶中，精密加入50%乙

6、醇50ml，超声提取30min，放冷，再称定重量，用50%乙醇补足重量，滤过，取续滤液经0.45μm滤膜滤过即得。2.2.3对照品溶液的制备精密称取在50℃真空干燥至恒重的槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷14.0mg，置50ml容量瓶中，加50%乙醇溶解并稀释至刻度摇匀，即得含量为0.280mg·ml-1的对照品储备溶液。2.2.4线性关系考察分别精密吸取槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷对照品储备溶液，用50%乙醇稀释成浓度分别为4.375，8.75，17.5，35，70和140μg·ml-1的系列对照品溶液，精密吸取上述对照品溶

7、液20μl，注入液相色谱仪，测定峰面积。以峰面积（Y）为纵坐标，浓度(μg·ml-1)为横坐标，绘制标准曲线，回归方程为：Y=33434X-61104，r=0.9998，表明槲皮素-3-O-葡糖醛酸苷在4.375～140μg·ml-1线性关系良好。2.2.5精密度实验精密吸取槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷对照品溶液(0.070mg·ml-1)20μl，按上述色谱条件进样分析，连续6次，测定峰面积，其RSD为1.40%，表明方法精密度良好。2.2.6稳定性实验精密吸取同一供试品溶液20μl，按上述色谱条件，分别于0，2，4，8

8、，12，24h测定峰面积。结果表明，槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷峰面积的RSD为2.10%(n=6)，说明供试品溶液在24h内稳定。2.2.7重复性实验取同一春柴胡药材5份，按供试品溶液制备方法制备供试品溶液，分别精密吸取20μl，按上述色谱条件进样测定峰面积，其RSD为2.17%(n=5)，表明方法重