不同强度恒磁场协同顺铂促进u2骨肉瘤细胞凋亡的分子机制

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1、不同强度恒磁场协同顺铂促进U2骨肉瘤细胞凋亡的分子机制戴闽，詹平，熊高飞，熊建卫【摘要】〔目的〕探讨不同强度恒磁场促进顺铂诱导的U2骨肉瘤细胞（U2-OS）细胞凋亡及p53、bcl-2、c-myc基因表达变化的情况。〔方法〕分别使用1mT、10mT、100mT恒磁场和加入3.0μg/ml顺铂的细胞培养液共同培养U2-OS细胞24h。采用四甲基氮唑蓝比色法（MTT法）、流式细胞术、逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测恒磁场和顺铂联合对U2骨肉瘤细胞体外增殖、凋亡及相关基因表达。〔结果〕不同强度恒磁场能促进顺铂对人U2-OS细胞的抑制作用，10G

2、s场强下其抑制率、凋亡率最高；凋亡率达37.66%，而p53mRNA表达最强，bcl-2、c-mycmRNA表达最弱。〔结论〕不同强度恒磁场协同顺铂通过诱导细胞内p53、bcl-2、c-myc基因表达的变化是其抗肿瘤的机制之一，10Gs场强下协同顺铂的抗肿瘤作用最强。【关键词】骨肉瘤；化疗；恒磁场；凋亡机制Abstract:〔Objective〕Toapproachtheexpressionofp53，bcl-2，c-mycgenesandapoptosisinducedbycisplatinassociatedagicfieldatdiffer

3、entintensitiesinU2-OScells.〔Methods〕Constantmagicfieldatdifferentintensities(10Gs,100Gs,1000Gs),cellculturefluidincluding3.0μg/mlcisplatinetry(FCM)orcellproliferation,geneexpressionandapoptosisinvitro.〔Results〕Constantmagicfieldatdifferentintensitiespromotetheinhibitoryeffect

4、ofcisplatin.Theeffectofcisplatinagicfieldmadethemaximuminhibitionrateandtheapoptosisrat.Theapoptosisrateaximump53expression,andminimumbcl-2,c-mycexpression.〔Conclusion〕Constantmagicfieldsatdifferentintensitiespromotepluscisplatincaninducep53,bcl-2andc-mycexpression.TenGsofcon

5、stantmagicfieldhasthestrongestantineoplasticeffect.Keyotherapy;constantmagicfield;apoptosis顺铂做为一种公认的抗骨肉瘤化疗方案中一线药物，在临床上使用广泛。但越来越多的化疗耐药及对化疗不敏感的病例出现使骨肉瘤治疗疗效停滞不前。通过研究不同强度的恒磁场对顺铂作用的人U2-OS细胞凋亡的分子机制，为提高骨肉瘤对化疗的敏感性提供理论依据。1材料与方法1.1材料（1）细胞来源及其培养：人U2-OS细胞株购于中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库，在含5%CO2、37℃

6、饱和湿度的培养箱中，用含10%胎牛血清（杭州四季青公司）的DMEM培养基（HyClone公司）培养，用0.25%胰蛋白酶（Gibco公司）消化传代。（2）药物和主要试剂：顺铂为Sigema公司实验用试剂，用生理盐水配制成1mg/ml的储存液，使用时用含10%胎牛血清的DMEM培养基稀释成3.0μg/ml浓度。噻唑蓝(MTT)购于上海普飞生物技术有限公司。DMSO试剂购于Sigema公司。TRIzol试剂产自Invitrogen公司。DEPC产自Ameresco公司。M-MLVReverseTranscriptase、Rnasin、dNTP、Oli

7、go(dT)15均产自Promega公司。PCR引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。1.2方法1.2.1分组及处理细胞呈对数生长后，实验分组为：①空白对照组；②阳性对照组：加入顺铂浓度3.0μg/ml的细胞培养液；③实验组1∶加入顺铂浓度3.0μg/ml的细胞培养液+1mT恒磁场共培养；④实验组2：加入顺铂浓度3.0μg/ml的细胞培养液+10mT恒磁场共培养；⑤实验组3：加入顺铂浓度3.0μg/ml的细胞培养液+100mT恒磁场共培养，作用时间为24h。1.2.2四唑蓝比色法（MTT法）取对数生长期U2-OS细胞经胰酶消化后计数,调整细

8、胞密度为5×104/mL,接种于96孔板,每孔100μL。设调零组、①②③④⑤组,每孔设5复孔,按上述方法处理细胞后，每孔加入5g/LM