大鼠被动型heymann肾炎模型建立与抗体剂量关系的探讨

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1、大鼠被动型Heymann肾炎模型建立与抗体剂量关系的探讨【摘要】目的：通过对被动型Heymann肾炎模型的建立与抗体剂量关系的研究，进一步探讨膜性肾病的发病机制。方法：成年雄性SD大鼠分为A、B、C3组，分别经尾静脉注射抗FX1A抗血清1ml/100g、0.5ml/100g以及生理盐水1ml/100g，1周后检测24h尿蛋白定量、血清白蛋白、血清肌酐、血清三酰甘油以及总胆固醇，分别在普通光学显微镜和透射电子显微镜下观察大鼠肾组织的病理学改变。结果：被动型Heymann肾炎模型的建立与SD大鼠尾静

2、脉注射抗FX1A抗血清的剂量存在正相关。结论：膜性肾病的发生可能与抗体剂量有关。【关键词】膜性肾病；被动型Heymann肾炎；过碘酸银甲胺染色[Abstract]Objective:Toinvestigatetherelationsofantibodydose-responseinpassiveheymannnephritisandtrytoprovidetheevidenceformembranousnephropathyinpathogenesis.Methods:MaleSprague-D

3、alydividedintothreegroupsand(1ml/100g,0.5ml/100g)andphysiologicalsaline(1ml/100g)indifferencethroughcaudalvein.Afteraalbumin,secrumcreatinine,secrumtriglycerideandsecrumtotalcholestorelerularlesionseasuredbylightandelectronicmicroscope.Results:TheSDr

4、atsdevelopedthetypicalclinicalandpathologicalpatternsofMNinresponsetoanoptimumdoseofanti-FX1Aserum.Conclusion:MNgenerationmayberelatedbranousnephropathy;PassiveHeymannnephritis；Periodicacidsilvermethanamine膜性肾病(membranousnephropathy,MN)是成人肾病综合征常见的病理类

5、型之一，但其发病机理尚未明确。大鼠Heymann肾炎(Heymannnephritis,HN)模型的病理改变及表现与人类膜性肾病十分相似，已作为人类膜性肾病的模型普遍应用，其中被动型Heymann肾炎(passiveHeymannnephritis,PHN)系予大鼠直接静脉注射抗肾小管刷状缘提取物(Fx1A)的抗体(或抗血清)诱发，模型较为稳定，制备所需时间相对较短，被广泛用于实验研究[1]。有关PHN模型建立过程中Fx1A抗体的剂量反应关系国内外报道较少，本研究旨在探讨PHN的建立与抗体剂量反

6、应的关系，为膜性肾病发病机制的实验研究奠定基础。1材料和方法1.1实验动物清洁级健康雄性SD大鼠，体重200~250g，由南通大学实验动物中心提供；普通级健康雄性新西兰大耳兔，体重2.5kg，购自南京金陵种兔场。饲养环境温度维持在（20±2）℃，分笼饲养，标准饲料，自由摄水，12h交替照明。1.2方法1.2.1Fx1A提取参考Malathi等（1979）方法改良。健康雄性SD大鼠3%戊巴比妥（50mg/kg）腹腔麻醉后于无菌条件下取肾皮质，按1∶30（v/mol/L甘露醇/2mmol/LTris

7、HCl（pH7.0）在冰浴中制成匀浆；加1mol/LCaCl2至终浓度为10mmol/L，4℃3000g离心15min，取上清液，43000g再离心20min，取沉淀用50mmol/L甘露醇/2mmol/LTrisHCl（pH7.0）重复洗涤1次。重复上述步骤1次。取沉淀加入0.01mol/LPBS（pH7.4）溶解即为Fx1A，考马斯亮蓝法于600nm波长比色进行蛋白定量。置-20℃冰箱备用。1.2.2Fx1A抗血清的制备与提取将Fx1A溶液与等量完全弗氏佐剂充分乳化后,于新西兰大耳兔的颈部、

8、背部、腹部以及四肢足垫皮下分点注射，每周1次，共免疫6次。从新西兰大耳兔耳缘静脉取血1ml，离心分离血清，用免疫双向扩散法测定抗血清的效价，达1∶32以上后经腹主动脉取血，置57℃水浴30min灭活补体，随后以5000g离心10min，吸取上清即为Fx1A抗血清，分管置-20℃冰箱备用。1.2.3实验分组与模型的建立将18只健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为A、B、C3组，每组6只。A、B、C3组分别经尾静脉一次性注射Fx1A抗血清1ml/100g、0.5ml/100g以及生理盐水1ml/100