中药提取物对龙胆叶枯病病原菌抗菌活性的筛选论文

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1、中药提取物对龙胆叶枯病病原菌抗菌活性的筛选论文孙海峰王喜军王苏艳杨婷【摘要】目的筛选抗龙胆叶枯病菌活性的中药。方法以龙胆叶枯病菌（Alternariasp.）为供试菌种，对9种中药乙醇提取物进行抗龙胆叶枯病菌活性实验，采用有限稀释法，测定最低抑菌浓度。结果9种中药乙醇提取物均有抑菌作用，其中蛇床子、川楝子提取物14d的最低抑菌浓度MIC100小于0.1g/ml。结论蛇床子、川楝子具有较强的抗龙胆叶枯病菌作用，可进一步开发为防治龙胆叶枯病药物。【关键词】中药杀菌剂抑菌作用活性筛选龙胆叶枯病Abstract:ObjectiveToscreentheantifungalactivityaga

2、instAlternariasp.ofTCMs.MethodsTheantifungalactivityagainstAlternariasp.fortheethanolextractsofninespeicesofTCMsitingdilutiontotesttheminimuminhibitoryconcentration.ResultsAlltheethanolextractsofTCMsexhibitedinhibitiononAlternariasp..TheminimuminhibitoryconcentrationofFructusCnidii,FructusTossen

3、danl.ConclusionTheantifungalactivityofFructusCnidii,FructusToosendanagainstAlternariasp..ismuchstrongerandcanbedeveloped.Keyl（即每毫升含1g生药）。浓缩液于冰箱（0～4℃）冷藏备用。1.2.2菌种活化将保存的菌种接于PDA培养基上培养4d备用。1.2.3抑菌实验在无菌操作条件下，以1g/ml生药的药液为原液，用灭菌PDA培养基稀释，分别稀释为原液的50%，40%，30%，20%，10%，5%，1%，0.8%，0.6%，0.4%，0.2%，0.1%（相当于每毫升含

4、0.5，0.4，0.3，0.2，0.1，0.05，0.01，0.008，0.006，0.004，0.002，0.001g生药）12个浓度的药基，对照为70%乙醇代替药液配制，并控制药基中的乙醇含量在15%以下（在配制高浓度的药基前，对加入的药液挥去部分乙醇），每管接种新培养的真菌菌落边缘2mm2的真菌菌丝块，重复3次，25℃培养。每天观察接种菌落生长情况，凡生长的菌落记为“+”，凡完全不生长的菌落记为“-”。1.2.4MIC100的确定MIC100为杀真菌剂(fungicide)的最低抑菌浓度，菌种接种在每种药物系列梯度浓度培养基上，恒温箱中培养7d和14d，用肉眼观察，接种菌块未扩大

5、，无细胞生长，取完全不生长管最低药物浓度为最低抑菌浓度(MIC)。2结果抗菌实验结果见表1。表19种中药乙醇提取物对龙胆叶枯病菌（Alternariasp.）的抑制作用（略）由表1给出各中药乙醇提取物的最低抑菌浓度，结果见表2。表2中药乙醇提取物对龙胆叶枯病菌（略）结果表明，9种中药乙醇提取物对龙胆叶枯病病菌（Alternariasp.）均有不同程度的抑制作用，随着培养时间的延长，抑菌作用逐渐减弱，培养7d最低抑菌浓度MIC100≤0.2g/ml有地肤子、蛇床子、白鲜皮、川楝子、大风子，最低抑菌浓度MIC100≤0.1g/ml有蛇床子、白鲜皮、川楝子；培养14d最低抑菌浓度≤0.2g/

6、ml有川楝子、蛇床子、大风子，培养14d最低抑菌浓度MIC100为0.1g/ml有川楝子、蛇床子。将药基上的菌种转接到无药PDA培养基上仍不能生长，表明真菌已被杀死，川楝子、蛇床子乙醇提取物有较强抗龙胆叶枯病菌（Alternariasp.）作用，其次为白鲜皮和大风子，可进一步作田间实验。3讨论用乙醇提取抗菌活性物质优于水提法［4，7］。本实验采用乙醇回流提取法，有利于生物碱等生物活性物质的提取，同时减少了提取液中蛋白质、多糖等杂质。本实验采用在药基上接种菌丝体的方法测定药物抗真菌活性，属于固体琼脂筛选抗真菌药物，并采用有限稀释法测定MIC100，该法操作简便。前人实验多采用培养基与药物

7、同时灭菌的方法，本实验在药基配制时，仅对培养基进行高温灭菌，冷却至70℃左右用微量移液器加入药物，药物有效成分不被破坏，在经长时间培养未滋生杂菌，实验方法可靠。由真菌引起的病害防治困难，只要有部分真菌细胞不被杀死，在适宜条件下就能生长繁殖，因此本抗菌实验以真菌生长完全受到抑制来评价抑菌效果,即在较长时间(14d)仍能保持对真菌生长的抑制，才是理想的抗菌药物。9种中药经长时间抑菌试验观察，川楝子、蛇床子乙醇提取物对龙胆叶枯病菌抑菌作用强而持久，是