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1、两种慢性内脏痛模型造模效果比较【摘要】目的比较大鼠新生期结直肠刺激和新生期母婴分离两种模型的造模效果,评价适用于慢性内脏痛研究的模型。方法雄性新生SpragueDam×2.5mm人血管重建气囊(MedtronicAVE,美国SantaRosa公司);多道生理信号采集处理系统(RM6240BD,成都仪器厂);自制乳胶气囊[1]。1.2方法1.2.1模型建立1.2.1.1CI组大鼠体质量15~18g,于出生后第8~14天每天上午用20mm×2.5mm人血管重建气囊给予梯度压力的结直肠扩张,气囊连接检压计控制压力,每天扩张1次,持续
2、1min。第8~10天每天扩张前予以生理盐水0.3mL灌肠;扩张压力第8~10天为40mmHg（1mmHg=133.3Pa），第11~12天为60mmHg,第13~14天为80mmHg。出生后第22天断奶,正常分笼饲养。1.2.1.2MS组大鼠于出生后第2~21天,每天上午与母鼠分开放入另一笼中,移至另一邻近房间,保持环境温度在(32±0.5)℃,3h后放回最初笼中与母鼠团聚。出生后第22天断奶,正常分笼饲养。1.2.1.3对照组出生后不给予任何处理,与前两组同时断奶,在相同环境中正常饲养。1.2.2模型评价指标大鼠成年后(出生
3、后60d),体质量约250g,剔除过轻或过重者,每组8只,双盲法检测。实验时保持安静,室温维持在25℃左右。1.2.2.1腹壁回撤反射(AG)大鼠实验前禁食不禁水18h,麻醉并置乳胶气囊于直肠(方法同1.2.2.1),仰卧位固定,将银丝双极电极插入腹股沟韧带上方距中线1.5cm的一侧腹外斜肌上,待其清醒并适应环境后记录不同CRD压力下腹外斜肌放电活动。CRD压力分别为20,40,60,80mmHg,各压力持续扩张20s,间隔4min。1.2.3组织学检查颈椎脱臼处死大鼠,取降结肠和直肠,10%福尔马林固定,石蜡切片,HE染色,
4、由病理学教师观察大鼠结肠组织结构的变化。1.3统计学处理各组数据结果用x±s表示,以SPSS13.0软件对样本均数进行t检验。P<0.05为有统计学意义。2结果2.1AS组在CRD压力20~80mmHg均显著高于对照组(P<0.05);CI组和MS组的AS组:新生期母婴分离.与对照组比较,☆:P<0.05.2.2痛阈CI组痛阈(20.42±4.25)mmHg,MS组(17.71±2.66)mmHg,均显著低于对照组(36.25±6.22)mmHg(P<0.05),CI组和MS组痛阈差别无统计学意义(P&g
5、t;0.05)。2.3EMG平均幅值比较各CRD压力下腹外斜肌的平均放电幅度与基础放电幅度的差值,各组基础放电幅度差别无统计学意义(P>0.05)。CI组在CRD压力20~40mmHg、MS组在20~60mmHg的EMG幅度显著高于对照组(P<0.05),2组在各水平CRD压力下的EMG幅度差别无统计学意义(P>0.05,表2)。2.4结直肠组织学CI组与对照组相较,结直肠黏膜无明显改变,黏膜下层结构完整,纤维结缔组织无增生,且无淋巴细胞、浆细胞浸润(图1)。表2不同CRD压力下各组腹外斜肌平均放电幅度3讨论3
6、.1CI模型AlChaer等最早报道的CI模型制备选在大鼠出生后8~21d内每天给予2次CRD60mmHg刺激,从而产生机械伤害性刺激以及一定程度的心理应激,导致成鼠出现临床IBS样表现[2];而本研究中CI模型则选在大鼠出生后8~14d内每天上午给予1次CRD刺激,而且CRD压力随着乳鼠成长从40~80mmHg逐渐增加,证明同样会诱发大鼠成年后持续性的内脏痛觉敏化,且组织学检查显示结直肠无明显的病理改变。应用梯度式渐进性的CRD,避免了造模早期过高的扩张压力可能对新生鼠肠壁造成的机械创伤(如结肠出血、破裂等),提高了造模的成
7、功率。林国威等报道在大鼠出生后8~14d内每天下午给予类似的CRD刺激亦会诱发成鼠内脏痛觉敏化[4]。上述方法造模时间虽有所不同,但并不会显著影响造模效果。3.2MS模型本研究中，MS模型制备选在大鼠出生后第2~21天每天进行母婴分离3h,利用这种早期负性生活事件造成新生期大鼠的心理应激,从而导致其成年后的内脏痛觉敏化[5],与Ren和Kalinichev等报道的MS模型造模效果一致[1,6],不同之处在于后者母婴分离的时间选择在出生后第2~14天,每天分离3h。这两种方法分离时间虽有所不同,但这些早期负性生活事件都引发了一定强
8、度的心理应激,均可引起大鼠成年后的内脏痛觉敏化。3.3两种模型比较3.3.1操作可控性CI模型制作对操作者的熟练程度有一定要求,初学者可能会因操作不慎而在造模过程中损伤乳鼠的结直肠,从而导致成年后大鼠结直肠的病理学改变,甚至引起乳鼠死亡。而MS模型制作方法简单、
