两种慢性内脏痛模型造模效果比较.doc

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1、两种慢性内脏痛模型造模效果比较【摘要】目的比较大鼠新生期结直肠刺激和新生期母婴分离两种模型的造模效果,评价适用于慢性内脏痛研究的模型。方法雄性新生SpragueDawley(SD)大鼠,随机分为结直肠刺激(CI)组、母婴分离(MS)组和对照组。CI组于出生第8~14天每天进行结直肠刺激,MS组于出生第2~21天进行母婴分离,对照组不予处理。大鼠成年后以腹壁回撤反射(AWR)评分、痛阈测定、腹外斜肌放电(EMG)幅度等指标评价其内脏痛觉敏化程度。结果CI组、MS组的AWR评分、EMG幅度均显著高于对照组(P<0.05),痛阈测

2、定显著低于对照组(P<0.05),但两模型组各项指标比较差别无统计学意义(P>0.05)。结论大鼠新生期结直肠刺激和新生期母婴分离两种造模方法都可引起成年大鼠的内脏痛觉敏化,造模效果基本无异,均适用于慢性内脏痛的研究。【关键词】肠易激综合征慢性病内脏疾病模型动物疼痛慢性内脏痛是临床常见病,同时亦是肠易激综合征(IBS)等很多疾病的临床表现之一。近年来研究认为慢性内脏高敏感(慢性内脏痛)是IBS胃肠动力紊乱的原因,因此受到了国内外学者的广泛关注。目前用于急性内脏痛研究的模型比较成熟,而慢性内脏痛却缺乏稳定可靠的动物模型,因

3、此其研究一直滞后于急性内脏痛和躯体痛。大鼠新生期结直肠刺激(CI)以及新生期母婴分离(MS)是目前有报道用于研究慢性内脏痛的两种模型[12],笔者对两种模型的造模效果进行比较,以评价适合用于慢性内脏痛研究的模型。1材料与方法1.1材料1.1.1动物及分组清洁级雄性新生SD大鼠3窝,每窝10~12只(福建医科大学实验动物中心提供,许可证号SCXK[闽]20040002)。随机将3窝新生鼠分为CI组、MS组和对照组。1.1.2仪器20mm×2.5mm人血管重建气囊(MedtronicAVE,美国SantaRosa公司);多道生理信号

4、采集处理系统(RM6240BD,成都仪器厂);自制乳胶气囊[1]。1.2方法1.2.1模型建立1.2.1.1CI组大鼠体质量15~18g,于出生后第8~14天每天上午用20mm×2.5mm人血管重建气囊给予梯度压力的结直肠扩张,气囊连接检压计控制压力,每天扩张1次,持续1min。第8~10天每天扩张前予以生理盐水0.3mL灌肠;扩张压力第8~10天为40mmHg（1mmHg=133.3Pa），第11~12天为60mmHg,第13~14天为805mmHg。出生后第22天断奶,正常分笼饲养。1.2.1.2MS组大鼠于出生后第2~21天,

5、每天上午与母鼠分开放入另一笼中,移至另一邻近房间,保持环境温度在(32±0.5)℃,3h后放回最初笼中与母鼠团聚。出生后第22天断奶,正常分笼饲养。1.2.1.3对照组出生后不给予任何处理,与前两组同时断奶,在相同环境中正常饲养。1.2.2模型评价指标大鼠成年后(出生后60d),体质量约250g,剔除过轻或过重者,每组8只,双盲法检测。实验时保持安静,室温维持在25℃左右。1.2.2.1腹壁回撤反射(AWR)评分大鼠实验前禁食不禁水18h,乙醚吸入麻醉,将带有乳胶气囊(直径2.5cm,长6cm)的导管经肛门插入直肠,使气囊尾端距离肛

6、门1cm,用胶带固定导管于鼠尾,导管经三通管连接注射器和检压计。将大鼠放入有机玻璃观察箱(20cm×6cm×8cm),待其醒来并适应环境后进行直结肠扩张(colorectaldistensions,CRD),扩张压力分别为20,40,60,80mmHg,各压力持续20s,间隔4min。根据大鼠反应进行AWR评分。评分标准为[2]:0分:无明显反应;1分:短暂的头部运动后停止;2分:腹部肌肉收缩;3分:腹部收缩并提起;4分:弓背并抬起骨盆。各压力重复作3次扩张并评分,取3次评分的平均数作为该压力下的AWR评分值。1.2.2.2痛阈测定

7、以每次5mmHg的递增压力加压,观察大鼠在3min内AWR评分基本稳定保持3分的最小CRD压力值为痛阈,重复测定3次,每次间隔4min,取平均数作为痛阈[3]。1.2.2.3腹外斜肌放电(EMG)大鼠实验前禁食不禁水18h,麻醉并置乳胶气囊于直肠(方法同1.2.2.1),仰卧位固定,将银丝双极电极插入腹股沟韧带上方距中线1.5cm的一侧腹外斜肌上,待其清醒并适应环境后记录不同CRD压力下腹外斜肌放电活动。CRD压力分别为20,40,60,80mmHg,各压力持续扩张20s,间隔4min。1.2.3组织学检查颈椎脱臼处死大鼠,取降结肠

8、和直肠,10%福尔马林固定,石蜡切片,HE染色,由病理学教师观察大鼠结肠组织结构的变化。1.3统计学处理各组数据结果用x±s表示,以SPSS13.0软件对样本均数进行t检验。P<0.05为有统计学意义。2结果2.1AWR评分C