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1、川芎嗪对结扎犬LAD损伤冠脉内皮及心肌的保护作用论文何维来，陈如坤，周汝元【关键词】心肌保护ProtectiveeffectoftetramethlpyrazineoncoronaryarteryendotheliumandcardiacmuscleafterLADligation【Abstract】AIM:Toexploretheprotectiveeffectoftetramethlpyrazineontheendotheliumandcardiacmuscleafteracuteinfarctioninducedindogsbyligatingthele
2、ftanteriordescendingcoronaryartery(LAD).METHODS:Fortyfiveagedhealthycrossbreddogs(15±7)kgethlpyrazine(TMP)group,verapamil(Ver)groupandcontrolgroup.TheoperationedtoligatethenearpartoftheLADthroughleftminimalthoracicincisiontoblock75%ofthebloodfloderivedfactorsNO,ET1,sPselectinandCTnT
3、beforeligationandatdifferenttimepointsafterligationuscleinedbyP），维拉帕米（Ver）和对照组（Control）3组，结扎LAD阻断血流75%，分别测定3组结扎前及结扎后不同时段的分泌型P选择素（sPselectin）、内皮素1（ET1）、一氧化氮（NO）及心肌肌钙蛋白T（CTnT）的含量变化，P），与维拉帕米（Verapamil,Ver）及空白对照组进行对比，分析TMP对在体复杂生理状态下内皮和心肌损伤的抑制作用，探讨其对冠状动脉狭窄的可能防治作用.1材料和方法1.1材料TMP纯度：99%，无锡第
4、七制药有限公司；Ver，上海禾丰制药有限公司.放免法测定内皮活性因子ET1试剂盒及硝酸还原酶法间接测定NO试剂盒由北京北免东雅生物技术研究所提供，分泌型P选择素(sPselectin)检测试剂盒及annheim公司；ViridiaM3多功能监护仪（德国产）,CYAM32麻醉呼吸机，γ放免检测仪，ACUSON128XP/10彩色多普勒电脑显像仪（美国产，探头频率2.5~4.0MHz）.1.2方法健康杂种犬45只，体质量（14.8±6.7）kg,雌雄不限,由安徽医科大学实验动物中心提供，随机分成3组，TMP组、Ver组和Control组（空白对照组），每组各15只
5、.首次用3g/L戊巴比妥钠30mg/kgiv初步麻醉动物后，气管插管接CYAM32麻醉呼吸机予机械通气，给予室内空气混合氧及氟烷；ViridiaM3多功能监护仪连续监测心电图、直接动脉压、中心静脉压，左侧第4肋间小切口进胸，打开心包，找到LAD，于LAD近端发出处约0.5cm，用换瓣线带针穿过前降支深面，备结扎阻断；将ACUSON128XP/10彩色多普勒超声的消毒探头(2.5~4.0MHz)直接置于备结扎处远断冠状动脉外心表，测量动脉的每分血流量［2］.根据血流量测定阻断75%并打结固定.分别于阻断前及阻断后5,15,.freelin经右心耳处抽血6mL，备
6、测NO,ET1水平，于阻断前及阻断后3和6h分别自静脉置管抽血2mL备测CTnT含量，及于阻断前及阻断后30min，2，6，12和24h备测Pselectin含量.于结扎后2和12h切取结扎后局部供血区心肌检测心肌组织Pselectin基因表达，并于结扎前切取正常心肌作为对比.TPM组于结扎前20min用10mg/kgTMP注射液iv，手术后3d连续注射TMP注射液10mg/(kgd)；Ver组于结扎前5min用0.5mg/kgVer加入生理盐水溶液中iv，手术后3d同样连续注射Ver0.5mg/(kgd)；Control组采用0.9g/L生理盐水20mLiv
7、.严格按各试剂盒说明书处理保存的被测样品，按要求采用放免法测定ET1含量，硝酸还原酶法测定NO-2/NO-3水平，并计算出NO的含量，快速一步法检测CTnT含量，双抗体夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA法）测定sPselectin含量.低温下提取心肌组织匀浆，缓冲剂(50mmol/LTris,pH7.5,150mmol/LNaCl,2mmol/LEDTA,1g/L三硝基甲苯X100,10g/L苯基烷硫酰氟化物,1g/L亮肽素,1g/L抑肽酶)处理，孵育10min，组织匀浆离心(3000r/min,5min,4℃)，上清液于280℃贮存，样品(每格100mg蛋白
8、，bihionicacidassay)
