天麻钩藤饮对自发性高血压大鼠心肌纤维化的影响

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时间:2018-11-19

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1、天麻钩藤饮对自发性高血压大鼠心肌纤维化的影响【摘要】【目的】研究天麻钩藤饮对自发性高血压大鼠(SHR)心肌纤维化的影响及可能的作用机制。【方法】将24只8周龄SHR随机分成3组:即天麻钩藤饮组(剂量为20g/kg)、卡托普利阳性对照组(剂量为100mg/kg)及高血压模型组(SHR组),并设正常对照组(同周龄正常血压大鼠8只),实验期24周。比较各组收缩压、左室质量(mLV)及左室质量指数(LV及yocardialfibrosis,MF)是高血压病引起的主要心脏病理改变,也是导致心力衰竭、心肌梗死以及心律失常甚至猝死发生的

2、重要原因之一[1]。因此,研究抑制和逆转心肌纤维化具有重要的意义。随着研究的深入,中医药干预高血压心肌纤维化取得了较好的疗效[2]。本实验观察了天麻钩藤饮对自发性高血压大鼠(SHR)心肌纤维化的影响并探讨其可能的机制,现报道如下。1材料与方法1.1动物自发性高血压大鼠(SHR)24只、正常血压大鼠(arker)为100bpDNALadder,由大连宝生物有限公司生产;逆转录-聚合酶链反应(RTPCR)试剂盒由大连宝生物有限公司生产;胰岛素样生长因子1(IGF1)及βactin引物由上海生物工程公司合成。1.4仪器R

3、BP1大鼠血压仪(中日友好医院);Libroraen210型分析天平(日本);UV754分光光度计(上海第三分析仪器厂);Universal30RF高速低温离心机(德国);GeneQuantⅡ型DNA/RNA纯度测定仪(Pharmacia产品);PE9600基因扩增仪(美国);PAC3000型电泳仪(BioRad产品);凝胶摄像及图像分析系统(KodakDigitalScience1DImageAnalysisSoftg/kg)和SHR组,每组8只,后3组均选用SHR大鼠。正常对照组和SHR组给予等容积蒸馏水,每日

4、1次,共灌胃给药24周。1.6检测指标1.6.1收缩压(pSB)的测量采用尾袖法,测定大鼠清醒状态下的尾动脉收缩压,按照血压仪说明书操作,连续测量3次,取平均值。1.6.2心脏质量、左心室质量和左心室质量指数的检测实验结束时大鼠称体质量(mbody)后处死,取出心脏,以4℃预冷生理盐水冲洗,滤纸吸干水分,称取心脏质量;沿房室交界剪去心房和右心室,称取剩余的左心室质量(mLV),并计算左心室质量指数:LV/mbody。1.6.3胶原含量(g湿重的心肌组织,用碱水解法测定心肌羟脯氨酸浓度(HC),乘以8.2,算出胶原含量。1.

5、6.4心肌组织内IGF1表达检测1.6.4.1引物序列设计[3]IGF1PCR产物长度152bp:上游:5GACCGAGGGGCTTTTAC3,下游:5TGCTTTTGTAGGCTTCAGTGG3;βactinPCR产物长度310bp:上游:5GAGCACCCTGTGCTGCTCACCCTAGG3,下游:5‐GTGGTGGTGAAGCTGTAGCCACTCT3。1.6.4.2总RNA提取取-70℃冻存心肌组织置直径为6.5cm的小陶瓷研钵中,加液氮将组织研成粉末状,再按1∶10比例加入T

6、rizol核酸提取液,继续研磨(在冰浴下操作)制成匀浆。按操作说明提取总RNA,测定其纯度和含量。提取的总RNAD260/D280在1.7~2.0之间,纯度>80%。1.6.4.3逆转录(RT)在10μL反应体系中,依次加入MgCl22μL,10倍PCRBuffer1μL,4种脱氧核苷酸混合物(dNTPMixture,各10mmol/L)1μL,OligodTAdaptorPrimer0.5μL,总RNA1μg,RNaseInhibitor0.25μL,AMVReverseTranscriptase0.5μL,RNase

7、FreedH2O补足至总体积10μL,混匀,短暂离心。RT条件:50℃、30min→99℃、5min→5℃、5min。反应完成后,取RT产物置-30℃保存。1.6.4.4聚合酶链反应(PCR)取200μLEP管,按以下顺序加入各试剂:RT产物10μL,5倍PCRBuffer10μL,上游特异性引物0.5μL,下游特异性引物0.5μL,TaKaRaExTagTMHS0.25μL,RNaseFreedH2O28.75μL,共50μL。轻轻混匀,短暂离心。PCR条件:94℃、2min(预变性)→94℃、2min(变性),55℃、

8、1min(退火),72℃、1min(延伸),循环35次→72℃、7min(继续延伸)。1.6.4.5检测PCR产物琼脂糖凝胶电泳,溴乙啶染色,显示DNA条带,采用紫外检测器测定各组条带的D值,并以凝胶图像分析软件分析相对含量。1.7统计学方法采用SPSS12.0统计软件进行统计分析。2结果2.1各组对大

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