天麻钩藤饮对自发性高血压大鼠心肌纤维化的影响

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1、天麻钩藤饮对自发性高血压大鼠心肌纤维化的影响【摘要】【目的】研究天麻钩藤饮对自发性高血压大鼠（SHR）心肌纤维化的影响及可能的作用机制。【方法】将24只8周龄SHR随机分成3组：即天麻钩藤饮组（剂量为20g/kg）、卡托普利阳性对照组（剂量为100mg/kg）及高血压模型组(SHR组)，并设正常对照组（同周龄正常血压大鼠8只），实验期24周。比较各组收缩压、左室质量（mLV）及左室质量指数（LV及yocardialfibrosis，MF）是高血压病引起的主要心脏病理改变，也是导致心力衰竭、心肌梗死以及心律失常甚至猝死发生的

2、重要原因之一［1］。因此，研究抑制和逆转心肌纤维化具有重要的意义。随着研究的深入，中医药干预高血压心肌纤维化取得了较好的疗效［2］。本实验观察了天麻钩藤饮对自发性高血压大鼠(SHR)心肌纤维化的影响并探讨其可能的机制，现报道如下。1材料与方法1.1动物自发性高血压大鼠（SHR）24只、正常血压大鼠（arker）为100bpDNALadder，由大连宝生物有限公司生产；逆转录-聚合酶链反应（RTPCR）试剂盒由大连宝生物有限公司生产；胰岛素样生长因子1（IGF1）及βactin引物由上海生物工程公司合成。1.4仪器R

3、BP1大鼠血压仪（中日友好医院）；Libroraen210型分析天平（日本）；UV754分光光度计（上海第三分析仪器厂）；Universal30RF高速低温离心机（德国）；GeneQuantⅡ型DNA/RNA纯度测定仪（Pharmacia产品）；PE9600基因扩增仪（美国）；PAC3000型电泳仪（BioRad产品）；凝胶摄像及图像分析系统（KodakDigitalScience1DImageAnalysisSoftg/kg）和SHR组，每组8只，后3组均选用SHR大鼠。正常对照组和SHR组给予等容积蒸馏水，每日

4、1次，共灌胃给药24周。1.6检测指标1.6.1收缩压（pSB）的测量采用尾袖法，测定大鼠清醒状态下的尾动脉收缩压，按照血压仪说明书操作，连续测量3次，取平均值。1.6.2心脏质量、左心室质量和左心室质量指数的检测实验结束时大鼠称体质量（mbody）后处死，取出心脏，以4℃预冷生理盐水冲洗，滤纸吸干水分，称取心脏质量；沿房室交界剪去心房和右心室，称取剩余的左心室质量（mLV），并计算左心室质量指数：LV/mbody。1.6.3胶原含量（g湿重的心肌组织，用碱水解法测定心肌羟脯氨酸浓度（HC），乘以8.2，算出胶原含量。1.

5、6.4心肌组织内IGF1表达检测1.6.4.1引物序列设计［3］IGF1PCR产物长度152bp：上游：5GACCGAGGGGCTTTTAC3，下游：5TGCTTTTGTAGGCTTCAGTGG3；βactinPCR产物长度310bp：上游：5GAGCACCCTGTGCTGCTCACCCTAGG3，下游：5‐GTGGTGGTGAAGCTGTAGCCACTCT3。1.6.4.2总RNA提取取-70℃冻存心肌组织置直径为6.5cm的小陶瓷研钵中，加液氮将组织研成粉末状，再按1∶10比例加入T

6、rizol核酸提取液，继续研磨（在冰浴下操作）制成匀浆。按操作说明提取总RNA，测定其纯度和含量。提取的总RNAD260/D280在1.7～2.0之间，纯度＞80%。1.6.4.3逆转录（RT）在10μL反应体系中，依次加入MgCl22μL，10倍PCRBuffer1μL，4种脱氧核苷酸混合物（dNTPMixture，各10mmol/L）1μL，OligodTAdaptorPrimer0.5μL，总RNA1μg，RNaseInhibitor0.25μL，AMVReverseTranscriptase0.5μL，RNase

7、FreedH2O补足至总体积10μL，混匀，短暂离心。RT条件：50℃、30min→99℃、5min→5℃、5min。反应完成后，取RT产物置-30℃保存。1.6.4.4聚合酶链反应（PCR）取200μLEP管，按以下顺序加入各试剂：RT产物10μL，5倍PCRBuffer10μL，上游特异性引物0.5μL，下游特异性引物0.5μL，TaKaRaExTagTMHS0.25μL，RNaseFreedH2O28.75μL，共50μL。轻轻混匀，短暂离心。PCR条件：94℃、2min（预变性）→94℃、2min（变性），55℃、

8、1min（退火），72℃、1min（延伸），循环35次→72℃、7min（继续延伸）。1.6.4.5检测PCR产物琼脂糖凝胶电泳，溴乙啶染色，显示DNA条带，采用紫外检测器测定各组条带的D值，并以凝胶图像分析软件分析相对含量。1.7统计学方法采用SPSS12.0统计软件进行统计分析。2结果2.1各组对大