凋亡相关基因pnas2的表达与白血病关系

《凋亡相关基因pnas2的表达与白血病关系》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、凋亡相关基因pnas2的表达与白血病关系作者：黄洪晖，朱坚轶，钟济华，王海嵘，钟华，韩洁英，陈芳源【摘要】本研究旨在探讨凋亡相关基因pnas2与白血病的关系。应用RTPCR技术检测硫化砷作用前后NB4、K562、U937细胞pnas2基因的表达及急性白血病病人治疗前后pnas2基因表达的变化。结果显示：NB4细胞在硫化砷作用后pnas2表达有明显下调，并呈时间依赖性；而K562及U937细胞在硫化砷作用后pnas2基因的表达无明显变化。急性白血病病人治疗前pnas2基因表达阳性率为100%，显著高于正常对照组；经非硫化砷诱导化疗

2、后，完全缓解病人pnas2基因的表达全部转为阴性；而未达到缓解的病例pnas2基因的表达仍为阳性，较化疗前无明显变化。结论：pnas2基因可能与硫化砷诱导APL细胞凋亡密切相关，同时其表达有可能作为急性白血病分子生物学缓解的指标之一。【关键词】白血病CorrelationbetiaAbstractThestudyia.TheRTPCRedtodetecttheexpressionlevelsofpnas2geneinNB4,K562,U937cellsbeforeandaftertreatmentarropatientsiabefor

3、eandafterchemotherapy.Theresultsshoedependentmanner,butthesameouteinK562andU937cellsafterbEingtreateduntreatedpatientsiaalcontrolgroup.Afterchemotherapy,theexpressionissionpatients,issionpatientsthereent.Itisconcludedthatthepnas2genemaybecloselyrelatedayconsiderasamolecula

4、rbiologicalremissionmarkerinacuteleukemia.Keyiapnas2基因是细胞凋亡相关蛋白的编码基因，有资料显示它是一条与NB4细胞凋亡密切相关的基因，但尚未见具体报道。本实验室在前期工作中，用基因表达谱芯片检测NB4细胞在硫化砷作用前后基因表达的变化，结果发现硫化砷处理后的NB4细胞有34条基因表达发生改变，分别涉及细胞凋亡、细胞周期、细胞信号转导、DNA合成，转录及修复、蛋白质翻译等相关基因，其中与凋亡密切相关的pnas2基因表达下调［1］。本实验基于基因表达谱芯片的结果，采用RT－PCR方法研究硫化

5、砷作用于NB4、K562、U937细胞后pnas2基因的表达变化，并检测了急性白血病病人化疗前后pnas2基因的表达，力图进一步探索pnas2基因与白血病的关系。材料和方法血液肿瘤细胞株及培养取NB4、K562、U937细胞（NB4细胞株由上海血液学研究所陈竺所长馈赠）1×105个细胞/毫升置于不含或含10mg/LAs4S4（美国AlfaAesar公司，纯度99.99%）的新鲜培养液（RPMI1640，Gibco公司产品）中（含10％小牛血清，1mmol/L谷氨酰胺，1mmol/L丙酮酸及100U/ml青霉素，100U/ml链霉素），于3

6、7℃、5％CO2、湿空气中培养，2、4、6、8小时后收集细胞。本院住院及门诊初发急性白血病病人9例，其中男6例，女3例，年龄18-57岁，中位年龄47岁，按MIC分型标准诊断，其中急性淋巴细胞白血病（ALL）1例；急性髓系白血病（AML）8例，包括M22例，M32例，M43例，M51例。诱导缓解方案为：对ALL病人采用DVP（柔红霉素，长春新碱，泼尼松）方案；AML病人采用DA（柔红霉素，阿糖胞苷）或MAV（米托蒽醌，阿糖胞苷，鬼臼噻吩甙）或CAG（阿克拉霉素，阿糖胞苷，粒细胞集落刺激因子）等方案；对M3病人采用全反式维甲酸（ATRA）治疗。以

7、完全缓解（CR）作为判断疗效指标。对照组4例，为类白血病反应1例，特发性血小板减少性紫癜病人3例。单个核细胞的分离采集患者骨髓液10ml，肝素抗凝。Ficoll淋巴细胞分离液分离单个核细胞，获得的细胞标本中白血病细胞比例均达80％以上。Ficoll分离法操作如下：抗凝骨髓4-6ml，用等量生理盐水稀释后，沿管壁缓慢加入已放有4-6mlFicoll淋巴细胞分离液的试管中，400×g室温离心20分钟，吸出单个核细胞层，用生理盐水洗涤2次。如混杂有红细胞，用4-6ml红细胞裂解液4℃放置8分钟，100×g离心5分钟，沉淀，加入5ml生理盐水洗涤，用计

8、数板计数，计算细胞总数。洗涤后细胞沉淀，加入TRIZOL1ml，-80℃冷冻保存待用。总RNA抽提TRIZOL总RNA抽提试剂盒购自Gibco公司。具