超声波提取连翘叶总黄酮与总酚酸的实验研究

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1、超声波提取连翘叶总黄酮与总酚酸的实验研究作者：田粟唐龙妹许丽琴丁月新刘汝俊马莉薛鹏【摘要】　　目的确定实验室超声波提取连翘叶总黄酮、总酚酸的最佳处理条件。方法采用正交设计法对甲醇浓度（A）、超声时间（B）、提取次数（C）和提取温度（D）4个因素进行考察，确定最优超声提取条件。结果因素D和C对测定指标均有显著性影响，因素A、B为不显著因素。结论以60%甲醇，超声时间10min/次，提取3次，提取温度45℃为最佳超声提取条件。【关键词】连翘叶；总黄酮；总酚酸；正交实验；超声提取　　Abstract：ObjectiveToascertaintheoptimalultrasonicconditio

2、nforextractionoftotalflavonoidsandtotalphenolicacidsfromForsythiasuspenseleavesbyorthogonaldesign.MethodsInthemethodoforthogonaltest,methanolconcentration(60%,70%,and80%),ultrasonictime(10min,15minand20min),extractiontimes(1,2,and3)andextractiontemperature(5℃,25℃,and45℃)peratureandextractiontimesh

3、adsignificanteffectonEithertotalflavonoidsandtotalphenolicacidscontents,methanolconcentrationandultrasonictimeethanolandthreetimes(10mineachtime)at45℃alconditionforextractionoftotalflavonoidsandtotalphenolicacidsfromForsythiasuspenseleaves.　　Keyg，置10ml量瓶中，加甲醇溶解定容，摇匀，得浓度为2mg/ml的芦丁标准溶液。精确移取芦丁的标准品溶液0

4、.05，0.10，0.15，0.20，0.25，0.30ml分别置于10ml量瓶中，用甲醇补足1ml。加入蒸馏水4ml，混合放置5min后，加5%亚硝酸钠溶液0.3ml和10%氯化铝溶液0.3ml，摇匀，放置6min，加1mol/L氢氧化钠溶液2ml后,用水定容至10ml,充分混合。510nm处测定吸光度，以吸光度A（Y）与浓度C（X）进行直线回归，得回归方程为Y=1.0963X+0.0677，r=0.9999。在0.01～0.06mg/ml线性关系良好。　　2.1.2样品溶液测定精密取适当量的以下所得各样品原液置于10ml量瓶中，用甲醇补足1ml，摇匀，作为供试品溶液。按标准曲线制备项下

5、操作，测定总黄酮含量。　　2.2总酚酸含量测定方法　　2.2.1标准曲线的制备精密称取没食子酸对照品18.8mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解定容，摇匀，得浓度为1mmol/L的没食子酸标准溶液。精确移取没食子酸的标准品溶液0.015，0.030，0.045，0.060，0.075，0.090ml分别置于3ml离心管中，用甲醇补足0.5ml。加入Folin-Ciocalteu试剂1ml，混合放置3min，加7.5%碳酸钠溶液1ml，摇匀，放置90min，10000r/min离心10min，750nm处测定吸光度，以吸光度A（Y）与浓度C（X）进行直线回归，得回归方程为Y=16.229X+

6、0.07，r=0.9999。在1.1×103～6.8×103mg/ml内线性关系良好。　　2.2.2样品溶液测定精密取适当量的以下各样品原液置于3ml离心管中，用甲醇补足0.5ml，摇匀，作为供试品溶液。按标准曲线制备项下操作，测定总酚酸含量。　　2.3提取溶液的选择精密称取连翘叶粉末0.50g，18份，置于50ml离心管中，分别加入5ml石油醚进行脱色脱脂处理，3000r/min离心，弃去醚液，重复进行两次后，将滤渣中的石油醚挥发干燥。分别加10ml沸水、甲醇、乙醇、丙酮、醋酸乙酯、正己烷分3次超声提取，20min/次，3000r/min离心，收集上清液减压浓缩至干。残渣用适量甲醇溶解，

7、转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为样品原液置于-18℃冰箱保存。稀释至适当浓度后，用于测定总黄酮、总酚酸含量。结果见表1。　　表1不同提取溶剂提取总黄酮、总酚酸含量的测定结果（略）　　从不同提取溶剂提取总黄酮、总酚酸含量的测定结果来看，甲醇提取物的总黄酮、总酚酸含量最高，说明甲醇提取连翘叶多酚成分的效果最好，故本研究选择甲醇作为提取溶剂。　　2.4超声提取条件的确定　　2.4.1正交实验设计选用L9(34)正