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时间:2018-11-19
《真菌2572的抗白细胞介素6受体活性成分研究》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、真菌2572的抗白细胞介素6受体活性成分研究邹迎曙张洋姜蓉李元吴剑波【摘要】目的从真菌2572的代谢产物中分离白细胞介素6受体(IL-6R)拮抗剂。方法利用多种色谱技术对活性部位进行分离纯化,并根据MS、NMR等光谱方法对化合物的结构进行了鉴定。结果从真菌2572代谢产物活性部位中得到两个化合物2572A和2572B。结论2572A已知为6-epi-5′-hydroxymycosporulone,有IL-6R拮抗活性,2572B为核黄素,活性较弱。【关键词】白细胞介素6受体拮抗剂;6-epi-5′
2、-hydroxymycosporulone;核黄素;结构研究ABSTRACTObjectiveToisolateIL-6Rantagonistsfromtheculturedbrothofthefungus2572.MethodsThepoundsulti-chromatographyandtheirchemicalstructuresthefermentedextracts.Conclusions2572Aand2572Bycosporuloneandriboflavin,respectivel
3、y.And2572Ashoaninterleukin6receptorantagonist;6-epi-5′-hydroxymycosporulone;Riboflavin;Structureidentification白细胞介素6(IL-6)是一种功能广泛的细胞因子,它的生物学功能十分复杂,并在多种疾病如风湿性关节炎、Castleman′s病、多发性骨髓瘤等症中扮演重要角色[1]。IL-6通过形成IL-6/IL-6R/gp130六聚体复合物后,方可进行信号的传导,发挥其生物学活性,而白细胞介素6
4、受体(IL-6R)是介导这个六聚体复合物形成的重要中介分子[2]。本实验选用以基因重组白细胞介素可溶性受体(sIL-6R)为靶位的IL-6R高通量筛选模型,从真菌2572的代谢产物中分离得到了两个化合物2572A和2572B,本文报道了这两个结构和IL-6R拮抗活性研究。1实验材料1.1菌株与培养基2572菌种来自本所菌种筛选中心。种子和发酵培养基:甘油1%,葡萄糖2%,蔗糖1%,黄豆饼粉0.2%,蛋白胨(F403)1%,聚乙二醇(6000)0.25%,KH2PO40.03%,NaNO30.3%,
5、(NH4)2SO40.3%,pH6.0。1.2仪器与试剂酶标比色计(Biorad),X5型大孔吸附树脂(天津南开大学化工厂),ODS/C18柱色谱介质(日本Shimadzu公司),SephadexLH-20(上海化学试剂厂),SephadexG-10(Solarbio),质谱仪(AccuTofCSLCMS),核磁共振仪(BrukerAM-400),所有化学试剂均为市售分析纯试剂,高效液相色谱仪(ShimadzuLC-10Avp),柱型号为InertsilODS-2(4.6mm×150mm),HPL
6、C检测条件:流动相为30%乙腈∶水,检测波长215nm,柱温25℃。2方法与结果2.1发酵斜面(YM培养基)26℃培养7d,接种于100ml种子培养基中(500ml培养瓶),26℃振荡(250r/min)培养48h,以2%转种至发酵培养基,26℃振荡培养96h,发酵液pH6.0。2.2提取分离与纯度鉴定将12L发酵液过滤,滤液通过X5型大孔树脂,弃去流出液,分别用30%、50%和80%丙酮洗脱,测活性发现活性部位主要集中于30%丙酮洗脱液中;收集30%洗脱液并挥去丙酮,用乙酸乙酯萃取;将乙酸乙酯部
7、分用少量甲醇溶解,上样于SephadexLH-20柱,50%甲醇洗脱,HPLC检测,按峰收集,得白色粗品A;将粗品A以少量甲醇溶解,上样于ODS/C18反相柱,以40%甲醇∶水系统洗脱,得一白色纯品2572A,冻干后为50mg,HPLC检测2572A保留时间为11.72min;将萃取后的水部分冷干上SephadexG-10柱,水洗脱,收集后端黄色段成分,冷干后再上ODS/C18反相柱,10%甲醇∶水(0.05%TFA)系统洗脱,得黄色纯品2572B,冻干后8mg,HPLC检测其保留时间为6.95m
8、in。(责任编辑:admin)2.3理化性质及结构鉴别2572A为白色无定形粉末,易溶于甲醇。其ESI-MS(positive)示:m/z225[M+H]+,247[M+Na]+,分子量为224。又由HRMS:m/z225.0769[M+H]+(Calcd.225.0763)确定分子式为C11H12O5。根据13C-NMR谱及DEPT谱(表1)可知,该化合物有4个季碳(δ197.2,171.9,158.6和59.9),5个表12572A的1H-NMR及13C-NMR数据-:碳谱及氢
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