真菌2572的抗白细胞介素6受体活性成分研究

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1、真菌2572的抗白细胞介素6受体活性成分研究邹迎曙张洋姜蓉李元吴剑波【摘要】目的从真菌2572的代谢产物中分离白细胞介素6受体(IL-6R)拮抗剂。方法利用多种色谱技术对活性部位进行分离纯化，并根据MS、NMR等光谱方法对化合物的结构进行了鉴定。结果从真菌2572代谢产物活性部位中得到两个化合物2572A和2572B。结论2572A已知为6-epi-5′-hydroxymycosporulone，有IL-6R拮抗活性，2572B为核黄素，活性较弱。【关键词】白细胞介素6受体拮抗剂；6-epi-5′

2、-hydroxymycosporulone；核黄素；结构研究ABSTRACTObjectiveToisolateIL-6Rantagonistsfromtheculturedbrothofthefungus2572.MethodsThepoundsulti-chromatographyandtheirchemicalstructuresthefermentedextracts.Conclusions2572Aand2572Bycosporuloneandriboflavin,respectivel

3、y.And2572Ashoaninterleukin6receptorantagonist;6-epi-5′-hydroxymycosporulone;Riboflavin;Structureidentification白细胞介素6(IL-6)是一种功能广泛的细胞因子，它的生物学功能十分复杂，并在多种疾病如风湿性关节炎、Castleman′s病、多发性骨髓瘤等症中扮演重要角色［1］。IL-6通过形成IL-6/IL-6R/gp130六聚体复合物后，方可进行信号的传导，发挥其生物学活性，而白细胞介素6

4、受体(IL-6R)是介导这个六聚体复合物形成的重要中介分子［2］。本实验选用以基因重组白细胞介素可溶性受体(sIL-6R)为靶位的IL-6R高通量筛选模型，从真菌2572的代谢产物中分离得到了两个化合物2572A和2572B，本文报道了这两个结构和IL-6R拮抗活性研究。1实验材料1.1菌株与培养基2572菌种来自本所菌种筛选中心。种子和发酵培养基：甘油1%，葡萄糖2%，蔗糖1%，黄豆饼粉0.2%，蛋白胨(F403)1%，聚乙二醇(6000)0.25%，KH2PO40.03%，NaNO30.3%，

5、(NH4)2SO40.3%，pH6.0。1.2仪器与试剂酶标比色计(Biorad)，X5型大孔吸附树脂(天津南开大学化工厂)，ODS/C18柱色谱介质(日本Shimadzu公司)，SephadexLH-20(上海化学试剂厂)，SephadexG-10(Solarbio)，质谱仪(AccuTofCSLCMS)，核磁共振仪(BrukerAM-400)，所有化学试剂均为市售分析纯试剂，高效液相色谱仪(ShimadzuLC-10Avp)，柱型号为InertsilODS-2(4.6mm×150mm)，HPL

6、C检测条件：流动相为30%乙腈∶水，检测波长215nm，柱温25℃。2方法与结果2.1发酵斜面(YM培养基)26℃培养7d，接种于100ml种子培养基中(500ml培养瓶)，26℃振荡(250r/min)培养48h，以2%转种至发酵培养基，26℃振荡培养96h，发酵液pH6.0。2.2提取分离与纯度鉴定将12L发酵液过滤，滤液通过X5型大孔树脂，弃去流出液，分别用30%、50%和80%丙酮洗脱，测活性发现活性部位主要集中于30%丙酮洗脱液中；收集30%洗脱液并挥去丙酮，用乙酸乙酯萃取；将乙酸乙酯部

7、分用少量甲醇溶解，上样于SephadexLH-20柱，50%甲醇洗脱，HPLC检测，按峰收集，得白色粗品A；将粗品A以少量甲醇溶解，上样于ODS/C18反相柱，以40%甲醇∶水系统洗脱，得一白色纯品2572A，冻干后为50mg，HPLC检测2572A保留时间为11.72min；将萃取后的水部分冷干上SephadexG-10柱，水洗脱，收集后端黄色段成分，冷干后再上ODS/C18反相柱，10%甲醇∶水(0.05%TFA)系统洗脱，得黄色纯品2572B，冻干后8mg，HPLC检测其保留时间为6.95m

8、in。(责任编辑：admin)2.3理化性质及结构鉴别2572A为白色无定形粉末，易溶于甲醇。其ESI-MS(positive)示：m/z225［M+H］+，247［M+Na］+，分子量为224。又由HRMS：m/z225.0769［M+H］+(Calcd.225.0763)确定分子式为C11H12O5。根据13C-NMR谱及DEPT谱(表1)可知，该化合物有4个季碳(δ197.2，171.9，158.6和59.9)，5个表12572A的1H-NMR及13C-NMR数据-：碳谱及氢