反相高效液相色谱法对茯苓饮片指纹图谱的研究

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1、反相高效液相色谱法对茯苓饮片指纹图谱的研究作者：芦锰，贺海花，杨云，张寒娟【摘要】　　目的建立茯苓饮片的指纹图谱。方法采用高效液相色谱法测定，乙腈-0.05%磷酸水，梯度洗脱，流速：1.0ml/min，柱温：30℃，紫外检测波长：242nm。结果茯苓饮片中有11个共有峰被确定为指纹峰，采用“ChromafingerV0.9beta”软件评价12批茯苓饮片指纹图谱的相似性，相关系数法大于0.8403，夹角余弦法大于0.9068。结论该方法简便，稳定，精密度高，重复性好，可用于茯苓饮片的鉴别，能够有效控制饮片质量。　【关键词】

2、茯苓饮片；高效液相色谱法；指纹图谱　　Abstract：ObjectiveToestablishHPLCfingerprintofPoriacocosherbs.MethodsHPLCobilephaseconsistedofacetonitrile-0.05%phosphoricacid-l/min.Thecolumntemperature.ResultsTheelevenmonpeaksofPoriacocosherbsinedasfingerprintpeaks.SimilarityafingerV0.9betafi

3、ngerprintanalysissoftilarityorethan84.03%bycorrelationcoefficientmethodandsimilarityorethan90.68%bycosinemethod.ConclusionThismethodissimple,stableandreproducible.ItcanbeusedtoidentifyandeffectivelycontrolqualityofPoriacocosherbs.　　Keym×250mm)高效液相色谱柱；工作站：CBM-102；检

4、测器：SPD-20A；TP600超声波提取器（北京天鹏电子新技术有限公司）；BS210S型电子天平（北京塞多利斯公司）。　　1.2试剂　　乙腈为色谱纯，磷酸为分析纯，水为双蒸水（经0.45μm微孔滤膜滤过），其他试剂均为分析纯。　　1.3药材　　茯苓药材分别采集于宛西制药有限公司GAP基地、河南商城等地共12批（样品来源及编号见表1）。按照本课题组研究的规范化炮制工艺进行浸泡、润蒸并切制成不同规格。表1样品来源及编号（略）　　2方法与结果　　2.1色谱条件大连伊利特Hypersil-ODS(4.6mm×250mm)高效液相

5、色谱柱；检测器：SPD-20A；工作站：CBM-102；流动相：乙腈-0.05%磷酸水，梯度洗脱（见表2）；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；检测波长：242nm。表2流动相梯度洗脱程序（略）　　2.2供试品溶液的制备　　取茯苓饮片，粉碎，过40目筛。取粉末约1.0g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加95%乙醇25ml，超声提取20min，过滤，残渣加95%乙醇重复提取两次，合并滤液并挥干乙醇，用色谱甲醇定容于10ml容量瓶中，临用前用0.45μm微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。　　2.3方法学考察　　2.3.1精密度实

6、验精密　　称取编号3药材，制备供试品溶液，连续进样5次，共有峰的相对保留时间RSD<0.452%，相对峰面积RSD<2.084%，结果表明仪器精密度良好。　　2.3.2稳定性实验精密　　称取编号3药材，制备供试品溶液，24h内连续进样5次，共有峰的相对保留时间RSD<0.636%，相对峰面积RSD<1.166%，结果表明常温下茯苓药材的供试品溶液24h内稳定性良好。　　2.3.3重复性实验精密　　称取编号3药材5份，制备供试品溶液，连续进样，共有峰的相对保留时间RSD<0.454%，相对峰面积

7、RSD<2.122%，结果表明重复性良好。　　2.4茯苓饮片HPLC指纹图谱及技术参数　　2.4.1指纹图谱选择及特征峰的标定［4］　　测定12批茯苓饮片60min内指纹图谱，获得11个共有峰，由指纹图谱可以看出10号峰峰面积积分百分比较大，分离度及峰形较好，因此选择10号峰作为参照峰，标号为S，其他特征峰依次标号为1，2，3，……，S，11。根据结果采用“ChromafingerV0.9beta”软件建立了茯苓饮片的色谱指纹图谱共有模式和茯苓饮片色谱叠加图结果见图1～2。　　2.4.2　茯苓饮片指纹图谱特征峰相对保

8、留时间和相对峰面积　　采用12批茯苓饮片的指纹图谱，选用10号峰作为参照峰，选取12批样品的共有峰共11个，计算相对保留时间和相对峰面积。结果见表3～4。表312批茯苓饮片共有峰相对保留时间，表412批茯苓饮片共有峰相对峰面积（略）。　　2.4.3指纹图谱相似度的计算采用“ChromafingerV0.