daz基因外显子与无精子症的关系论文

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1、DAZ基因外显子与无精子症的关系论文王恒才路西兰侯孟彦张迎春王红霞张意茗【摘要】目的探讨Y染色体无精子缺失(DAZ)基因外显子与无精子症的关系。方法应用多重聚合酶链反应(PCR)技术对97例无精子症病人和60例正常生育男性DAZ基因外显子进行检测。结果97例无精子症病人DAZ基因外显子缺失4例,缺失率4.12%，正常生育男性DAZ外显子未检测到缺失。结论DAZ基因外显子缺失可导致无精子症;检测不育病人是否有Y染色体微缺失，对于通过辅助生殖技术(ART)将这种基因缺陷遗传给下一代的可能性评估具有重要意义。【关键词】少精子症;Y染色体;DAZ外显子;聚合酶链反应;不育,男(

2、雄)性ABSTRACTObjectiveToexploretherelationshipbetosomeandazoospermia.MethodsDAZexonserasechainreactions(PCR)in97patientsiaand60normalmen.ResultsOf97patients,DAZexondeletionayresultinazoospermia.AdetectionofYmicrodeletionisofgreatimportancetoassessthepossibilityofdescendingthisgenedefecttoo

3、ffspringthroughassistedreproductivetechnology.KEYgCl2,10mmol/LTrisHCl(pH8.0),50mmol/LKCl，200μmol/LdNTP，TaqDNA聚合酶1U。PCR反应参数为94℃预变性4min后，94℃30s，58℃45s，72℃45s，共完成35个循环，最后72℃延伸3min,然后置4℃保温。产物用10g/L琼脂糖凝胶电泳,60V恒压电泳30min，溴乙锭染色后在紫外线灯下观察结果,并照相保存。为排除假阳性反应，对微缺失的标本进行3次PCR重复检测,.freelL,卵泡刺激素(FSH)全部高于

4、正常值，1例病人泌乳素(PRL)高于正常值。M：DNAMarkerDL2000;④～⑦为正常对照，①～③为DAZ外显子1、4、5区缺失;⑧～⑩为DAZ外显子2、3、6区缺失。图1DAZ外显子PCR扩增电泳图3讨论精子发生是在以特异基因为主导的多基因相互作用的遗传网络调控下的复杂过程。TIEPLOLO等1发现无精子病人有Y染色体长臂(Yq11.23)缺失，推测该区存在调控精子生成的部位，由于该核型病人几乎都无精，故称该部位为AZF。现已明确至少有3个精子生成部位(AZFa、AZFb、AZFc)，分别位于Yq11.23的近、中、远端。这些区域的基因微缺失可引起精子发生障碍,

5、继而引起男性不育。DAZ为多拷贝基因，又称DAZ家族，是AZFc的最佳候选基因2。DAZ在睾丸特异性表达，表明DAZ基因只参与男性特有的生理过程。国内文献报道，DAZ基因微缺失率为7.9%～15.2%不等，少精子症缺失率为5.0%～19.0%，无精子症缺失率为10.0%～36.6%35。本文资料显示，无精子症病人DAZ基因外显子缺失率为4.12%。国内文献尚未见关于DAZ基因外显子缺失的报道。本文资料的结果显示，4例DAZ基因外显子缺失病人每侧睾丸的体积从3mL至正常不等。从唯支持细胞综合征到生精不足均有DAZ基因缺失,提示DAZ基因在精子生成过程中不起决定性作用,其

6、作用可能是在精子生成早期影响精原细胞的增殖或前体细胞的分化,使精子发育阻断于不同阶段,出现多样性表型6。已有研究结果显示，部分生精障碍的无精子、严重少精子病人，是由于Y染色体AZF区的微缺失而造成的7。但是,本文资料及相关文献显示大部分无精子病人Y染色体并没有检测出微缺失,这说明可能因为存在某些更微小的缺失或点突变,或因为某些精子发生相关基因位于所研究的区域之外,甚至位于常染色体上,因此有必要再去寻找新的精子发生基因。Y染色体微缺失的检测使临床上一些原因不明的无精症或少精症病人从分子水平上明确了病因,为临床医师的诊疗过程提供了临床依据。检测不育病人是否有Y染色体微缺失，

7、对于通过辅助生殖技术(ART)将这种基因缺陷遗传给下一代的可能性评估也具有重要意义。【