威灵仙类药材中多糖含量的比较

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1、威灵仙类药材中多糖含量的比较作者：王祥培，黄婕，靳凤云，吴红梅，孙宜春，阳涛【摘要】　　目的探讨威灵仙类药材中多糖含量的差异。方法采用苯酚-硫酸比色法测定威灵仙类药材中多糖的含量;测定波长487nm。结果威灵仙类药材中多糖含量有明显差异。结论应注意品种、生长环境等因素对药材质量的影响。【关键词】威灵仙类药材　多糖　苯酚-硫酸比色法　　Abstract：ObjectiveToparethecontentsofpolysaccharidesinmedicinalmateriasofethodsThepolysaccharidescontentofmedicinalmater

2、iasofBE型真空干燥箱（上海博讯实业），METTLERAB204-S型电子天平（美国梅特勒-托利多）。无水葡萄糖（天津科密欧，分析纯，批号20070807），乙醇，苯酚，浓硫酸，正丁醇，无水乙醇，丙酮，乙醚等试剂均为分析纯。柱果铁线莲ClematisuncinataChamp.根及根茎，威灵仙ClematischinesisOsbeck根及根茎，山木通ClematisfiianaLevl.根及根茎，均由贵阳中医学院王祥培副教授鉴定。　　2方法与结果　　2.1多糖的提取与精制称取已干燥的混合粉末（威灵仙、柱果铁线莲、山木通的粉末各30g）90g，置圆底烧瓶中，加入80

3、%乙醇1000ml，90℃回流提取2h，抽滤，滤渣挥干溶剂后，滤渣加15倍量蒸馏水，于沸水浴回流提取2h，双层滤布过滤，残渣加15倍量蒸馏水，沸水浴重复提取1次，合并两次滤液，减压浓缩至200ml，放冷，加入适量醋酸乙酯于50℃保温脱脂20min，减压回收醋酸乙酯，用Sevage法除蛋白，反复进行8次至无蛋白层。除蛋白后的提取液加入终浓度为3%的过氧化氢，于50℃下保温脱色30min。放冷后，加入乙醇至含醇量为85%，于4℃下静置过夜，再离心分离（3000r/min，10min），沉淀依次用无水乙醇、丙酮、乙醚各淋洗3次，60℃真空干燥至恒重，即得精制的混合多糖1.61

4、46g(得率1.79%)，密封保存备用。　　2.2精制多糖的鉴别取混合多糖2mg，用蒸馏水10ml溶解后精密吸取1ml至具塞试管中，加入1mlα-萘酚溶液，混匀后沿试管壁加入浓硫酸溶液1ml，静置观察。实验结果表明，液面交界处有混合多糖紫红色环状阳性反应。　　2.3标准溶液的配制精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖15.57mg，置100ml容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，摇匀，制成0.1557mg/ml的标准溶液。　　2.45%苯酚溶液的配制取苯酚100g，加铝片0.1g和碳酸氢钠0.05g，常压蒸馏，收集182℃馏分。精密称取该馏分13.0012g，置于250ml

5、容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，摇匀后滤过至棕色试剂瓶中，放冰箱备用。　　2.5测定波长的选择精密吸取0.1557mg/ml葡萄糖溶液和样品溶液各1.0ml，置10ml具塞试管中，加入5%苯酚溶液1.0ml，混匀，迅速加入浓硫酸5.0ml，摇匀后放置5min，置60℃水浴中加热20min，取出置冷水中冷却至室温，以相应的试剂为空白，在400～800nm进行扫描，在487nm有最大吸收。　　2.6标准曲线的制作精密吸取上述标准品溶液0.05，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5ml于10ml具塞试管中，分别用蒸馏水补至1.0ml，摇匀。另取1.0ml蒸馏水作空白对照

6、。各管再加入1.0ml的苯酚溶液，混匀，迅速加入浓H2SO45.0ml，摇匀后放置5min，置60℃水浴中加热20min，取出置冷水中冷却至室温，于487nm处测定吸光度。以吸光度为横坐标，葡萄糖浓度为纵坐标，绘制标准曲线，经过计算得回归方程：C=13.195A+0.1805，r=0.9999，葡萄糖量在7.785～62.28μg范围内与吸光度呈良好的线性关系。　　2.7换算因子的测定取60℃干燥至恒重的精制混合多糖约10mg，精密称定，置100ml容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，摇匀作贮备液。精密吸取贮备液0.5ml用蒸馏水补至1.0ml，摇匀。同标准曲线项下方法

7、测定吸光度，由回归方程中求出3种药材的混合多糖溶液中葡萄糖浓度，按下式计算，测得平均换算因子f=1.677。换算因素f=g)；C为多糖贮备液中葡萄糖浓度(mg/ml)；D为多糖的稀释因素（ml）。　　2.8样品溶液的制备取各药材粗粉约0.5g（过40目筛）置三角烧瓶中，精密称定，加入40ml80%乙醇，90℃回流提取1h，趁热过滤，药渣用80%热乙醇洗涤(10ml×3)后，挥干溶剂。药渣连同滤纸置烧瓶中，加蒸馏水50ml置沸水温浸提取1h，趁热过滤，药渣用热水洗涤(10ml×3)，洗液并入滤液中，置冷后，转移至100ml容量瓶中，以蒸馏水