160株新生儿肺炎克雷伯菌的耐药性分析论文

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1、160株新生儿肺炎克雷伯菌的耐药性分析论文【摘要】目的分析我院新生儿科病区产ESBLs、AmpC酶的肺炎克雷伯菌的耐药情况，指导临床合理用药。方法按CLSI推荐的超广谱β内酰胺酶(ESBLs)确证试验,对肺炎克雷伯菌进行ESBLs检测,并用三维试验法、三维试验抑制试验进行AmpC酶检测。结果160株肺炎克雷伯菌中,检到产ESBLs肺炎克雷伯菌84株，阳性率高达52.50%。71株耐头孢西丁菌株检到23株产AmpC酶，其中单产AmpC酶5株，产Ampc+ESBLs菌株18株。AmpC酶阳性率为14.38%（23/160）。结论分离自我院新生

2、儿科的肺炎克雷伯菌对β-内酰胺类抗菌药物耐药严重，主要以产ESBLs和（或）AmpC酶为主。给临床抗感染治疗带来很大困难，是院内感染的一大隐患。【关键词】超广谱β-内酰胺酶AmpC酶肺炎克雷伯菌三维试验三维抑制试验AmpC酶是继ESBLs之后,临床上出现的肠杆菌科细菌的又一重要耐药机制,肺炎克雷伯菌作为条件致病菌是新生儿感染性肺炎的常见病原菌，也是重要的院内感染病原菌,在医院感染分离率一直趋于首位。近年来,由于广谱抗菌药物的广泛大量应用,导致这些细菌出现高产AmpC酶菌株。近年来.freelpC酶的基因已转移到质粒上，并在大肠埃希菌及肺炎

3、克雷伯菌中出现1，易在不同菌种间横向播散。所以监测和检测这类细菌产ESBLs和AmpC酶的情况,对指导临床合理使用抗菌药物以及预防和控制院内感染的发生具有重要的意义。1材料与方法1.1材料1.1.1菌株来源肺炎克雷伯菌160株均分离自2008年1月至2008年12月我院新生儿病区患儿呼吸道标本。1.1.2一次性培养皿与药敏纸片一次性培养皿为郑州博赛产品；药敏纸片为英国OXOID公司产品。1.1.3试剂克拉维酸（中国药品生物制品检定所）；邻氯西林（上海四药有限公司）。1.1.4质控菌株E.coliATCC25922，K.pneumoniae

4、ATCC700603，E.cloacae029，E.cloacae029M。1.2方法1.2.1药敏试验按CLSI推荐的K-B纸片法进行测定，并按其制定的标准进行判读。1.2.2超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)检测按CLSI推荐的确证试验测定ESBLs。1.2.3产AmpC酶菌株初筛采用K-B法，按照CLSI推荐的方法进行2，头孢西丁(30μg/片)抑菌环直径≤17mm时，提示对FOX中介或耐药为疑产AmpC酶菌株。1.2.4β-内酰胺酶粗提取物的制备取50μl0.5麦氏单位菌液加入12ml胰蛋白胨肉汤中，35℃恒温摇床孵育6h,4000

5、r/min，4℃离心20min，弃上清，将沉淀物-70℃反复冻融5次，加入pH7.0的0.01mol/L磷酸盐缓冲液1.2ml混匀，14000r/min，4℃离心20min，取上清液即为酶粗提物，无菌试验后-20℃保存。1.2.5三维试验对可疑菌株的酶提取物用头孢西丁三维试验方法进行AmpC酶确证。1.2.6三维试验抑制试验3在涂有E.coliATCC25922菌液的M-H平皿中央贴1片30μg头孢曲松纸片,垂直挖四个狭缝,分别加入40μl的试验菌株酶粗提取物、36μl酶粗提取物+4μl2mmol/L邻氯西林、36μl酶粗提取物+4μl2

6、mmol/L克拉维酸、36μl酶粗提取物+4μl2mmol/L克拉维酸+4μl2mmol/L邻氯西林,.freelpC酶菌株初筛试验检出可疑产AmpC酶细菌71株，经头孢西丁三维试验方法确证产AmpC酶细菌5株。经三维抑制试验确证单产AmpC酶菌株5株（与三维试验相符），单产ESBLs菌株84株（与ESBLs纸片确证试验相符）。同时产Ampc+ESBLs菌株18株，即产超超广谱β内酰胺酶(SSBLs)，耐药情况非常严重，对β-内酰胺类抗菌药物（包括含酶抑制剂的复合制剂）全部耐药，氨基糖苷类、喹诺酮类耐药率也有所提高，仅碳青酶烯类未出现耐药

7、。3讨论超广谱β内酰胺酶（ESBLs）属于Bush分类2be亚组，分子分类中属于A类酶，ESBLs是目前肠杆菌科细菌（尤其是肺炎克雷伯菌）对广谱头孢菌素产生耐药的最主要原因，它由质粒介导，可使细菌对青霉素和一、二、三、四代头孢菌素以及单环菌素耐药，但对头霉素、碳青酶烯类及酶抑制剂（克拉维酸）敏感。AmpCβ内酰胺酶是由革兰氏阴性杆菌产生的主要由染色体介导的丝氨酸头孢菌素酶组成的一个酶家族，属于Bush分类中的Ⅰ组（C类），能水解三代头孢，不被β内酰胺酶抑制剂克拉维酸所抑制。研究表明:β-内酰胺类抗菌药物头孢西丁和碳青酶烯抗菌药物亚胺培南是

8、强有力的AmpC酶诱导剂4。如果用头孢西丁或头孢西丁联合第三代头孢菌素治疗含有ampC基因的肠杆菌科细菌如肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌，那么在治疗过程中会因为AmpC酶的大量产生而导致治疗失败。理