非小细胞肺癌中磷酸化蛋白激酶b及血管内皮生长因子蛋白的表达

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1、非小细胞肺癌中磷酸化蛋白激酶B及血管内皮生长因子蛋白的表达作者：李侠王玲高锡刚高娟李淑岷【摘要】目的观察磷酸化蛋白激酶B(PAKT)、血管内皮生长因子(VEGF)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达，并通过研究癌组织中PAKT与血管生成的关系，初步探讨PAKT在肺癌发生发展及转移中的机制，为肺癌的早期诊断提供可供参考的新方法。方法用免疫组化SP法对61例NSCLC及20例肺良性瘤样病变周围正常组织中PAKT、VEGF的表达进行检测，观察肺癌及正常组织中PAKT、VEGF的表达及与临床病理各因素相互关系，分析NSCL

2、C中PAKT、VEGF之间的相关性。结果NSCLC中PAKT蛋白阳性表达44.3%(27/61)，明显高于正常组织0%(0/20)(χ2=13.28,P<0.05),其蛋白表达与肿瘤分化程度明显相关。VEGF在NSCLC及正常组织中的阳性表达率分别为61.6%(37/61)和25%(5/20)，二者差异显著(χ2=5.70，P<0.05)，VEGF的表达与TNM分期、组织类型、淋巴结转移明显相关。PAKT与VEGF的表达明显相关。结论NSCLC中PAKT的表达明显增高，其过表达与VEGF相关，PAKT对肺

3、癌血管生成的调节可能与上调VEGF有关。【关键词】非小细胞肺癌;蛋白激酶B;血管内皮生长因子;血管生成AKT蛋白是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，因与蛋白激酶A(PKA)和蛋白激酶C(PKC)在结构上很相似，因此，又被命名为蛋白激酶B(PKB)，其功能的发挥有赖于位点的磷酸化。研究发现,在许多人类肿瘤中存在AKT频繁激活,并通过磷酸化其下游的多种作用底物促进肿瘤血管生成、细胞的侵袭、转移〔1〕。而肿瘤的生长必须有新生血管提供营养，血管内皮生长因子(VEGF)可以改变内皮细胞基因的活化，诱导血管的形成〔2〕;AKT可以通过多种途径促

4、进血管的生成。目前关于磷酸化蛋白激酶B(PAKT)在肺癌中表达的报道甚少，尤其是肺癌组织中AKT活化与肿瘤血管生成的研究鲜见报道。我们通过观察肺癌组织和正常肺组织中PAKT、VEGF的表达，探讨AKT的活化与肿瘤的发生发展及其血管生成的关系。　　1资料与方法　　1.1研究对象标本来源于山东大学齐鲁医院病理科，均为该院2004年6月至2006年6月经常规病理切片证实的非小细胞肺癌(NSCLC)61例，男40例，女21例，年龄34～79岁，平均60.0岁。依据1997年新的修订标准进行TNM分期〔3〕,其中Ⅰ期15例，Ⅱ期15

5、例，Ⅲ期24例，Ⅳ期7例;按病理形态学分为：鳞状细胞癌32例，腺癌29例;按分化程度分为：高分化4例,中分化24例，低未分化33例;按有无淋巴结转移分为：有淋巴结转移32例，无淋巴结转移29例;患者均为原发性肺癌，术前均未接受过化疗或放疗等任何治疗;肺癌组织取自肿块中央非坏死部分。取肺良性瘤样病变周围5cm以上正常组织20例，其中结核球8例，肺平滑肌瘤2例，错构瘤3例，炎性假瘤7例;所有标本术后均经HE染色法重复染色，由两位病理医生会诊后确诊;标本经10%福尔马林固定，常规脱水石蜡包埋。　　1.2主要试剂及检测方法PAKT兔

6、抗人单克隆抗体由美国CellSignaling生物技术有限公司提供，工作浓度为1∶50;VEGF鼠抗人单克隆抗体及SP试剂盒均为即用型由北京中山生物技术有限公司提供。将标本制成4μm厚连续石蜡切片，采用链霉素抗生物素蛋白-过氧化酶连接(SP)免疫组织化学方法染色，用PBS代替一抗作为阴性对照，步骤按说明书。　　1.3结果判断及统计学处理光学显微镜下观察PAKT阳性蛋白为细胞浆染色呈淡黄色至棕黄色，PAKT按着色细胞百分数计分〔4〕：0%记为0分，1%～50%记为1分，51%～100%记为2分。按染色强度计分：细胞未染色

7、0分，染色较弱为1分，中度染色为2分，强染色为3分。最后以阳性细胞的百分比记分和染色强度记分之和进行结果判定：0～2分为阴性(-),3～5分为阳性(+)。VEGF按照Vlom等〔5〕的评判标准：选染色均匀的癌间质区，在400倍视野下，以着色细胞占视野细胞总数的多少分为0～3级。0级：0;1级：<25%;2级：26%～50%;3级：>50%。0级为阴性，1级以上为阳性。　　1.4统计学处理数据用率(%)表示，采用χ2检验，用SPSS10.0软件进行统计学分析。　　2结果　　2.1肺癌、肺良性病变组织中PAKT、VE

8、GF的表达PAKT蛋白表达阳性染色主要定位于肺癌细胞胞浆中，为粗细不一的棕黄色颗粒，在61例肺癌组织中27例PAKT蛋白表达阳性，20例正常肺组织中未见PAKT蛋白的表达。61例NSCLC组织中PAKT蛋白表达(44.3%)明显高于癌旁组织(0%)，二者有显著性差异(